实验报告十 单光子分析仪与植物细胞活性氧检测.pdfVIP

课程名称：生物仪器分析指导老师：成绩：_______________________

实验名称：单光子分析仪与植物细胞活性氧检测实验类型：探究

一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）

三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤（必填）

五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析

七、讨论、心得

装一、实验目的和要求

1、了解并掌握单光子分析仪的原理。

订2、掌握用单光子分析仪测定植物活性氧的方法。

二、实验内容和原理

线内容：

1、用单光子分析仪测定植物活性氧。

2、同时制作对照组。

原理：

1、植物产生活性氧原理

植物与病原物互作后的信号传递激活了包括活性氧(AOS：activeoxidespecies)的生成和其它各

类防卫反应。活性氧进发(oxidativeburst)被认为是过敏反应(HR：hypersensitiveresponse)的特征

性反应，也是植物对病原物应答的最早期反应之一。

AOS主要由病原菌诱导产生，其中非亲和病菌诱导AOS进发强烈且持续时间长。植物在处于一些逆

境(stress)条件下，(例如：低温、紫外光)，也能产生AOS。

植物体内主要的AOS是：超氧阴离子(•O-)、过氧化氢(HO)、羟自由基(•OH-)。它们之间可以相

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互转变。其中•OH-极为活泼，能与有机化合物作用产生自由基链反应，氧化细胞质膜成分，使酶失活、

核酸降解，从而导致细胞损坏，组织坏死，产生过敏反应。

植物具有完整的体系来调节活性氧的生成和积累，确保有效信号传导，这样既可使植物能抑制病菌

的感染和再度侵入，又能使自身少受氧化胁迫。

2、化学发光法检测活性氧

H0可以氧化化学发光试剂如发光氨(鲁米诺)并释放出光子(photon)，根据发光强弱得以定量测

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定。该方法是测定光子数而非反应的化学产物，在植物活性氧检测中应用也相当广泛。

3、单光子分析仪原理

单光子分析仪组成：图像增强器、锥形光导纤维束、读出相机

图像增强器组成：输入窗口、光电阴极、MCP、荧光屏

工作原理：光电阴极将输入的光子转换为光电子，通过MCP将光电子增强，荧光屏将增强的光电子

重新转换为光子，做到将微弱的光增强的原理。单光子分析仪通过每一小段时间拍摄一张照片，记录检

测过程中光线的变化，电脑显示器上的光照强度是多张照片叠加的结果。

三、主要仪器设备

单光子分析仪

四、操作方法和实验步骤

（1）植物叶的预处理，用打孔器去一片植物叶，加入50μl水放置一夜。

（2）开机预热、清洗仪器、设定参数

（3）第一列加入50μl水和鲁米诺混合液，作为空白对照。

第二列加入50μl25nM鞭毛蛋白、水和鲁米诺混合液。

三四列不加任何东西。

（4）测定发光信号。

（5）观察测试结果。

（6）使用电脑软件进行分析。

五、实验数据记录和处理

1、检测的过程中光变化

图1图2图3

图4图5图6

图5光照随时间的变化

2、使用软件进行分析

图6选择3个点各自做一条光照随时间的变化