第七章 抗原抗体反应课件.pptVIP

第七章抗原抗体反应*左右二孔抗原浓度相同，沉淀线融合右孔抗原浓度较低，沉淀线细并靠近抗原孔右孔抗原甚微，近抗原孔处只有一弯眉双向：不同抗原浓度对沉淀线特征的影响继续第七章抗原抗体反应*在抗原抗体多种体系中沉淀线的特征(一)在抗原孔内有三种抗原成分，分别与相应抗体形成3条沉淀线。由于反应的特异性，线互不干扰，线的顺序位置决定于抗原的性质二孔内抗原成分性质完全不同，出现沉淀线交叉现象左孔内含二种抗原成分，其中一种与右孔内相同，出现一条融合线继续第七章抗原抗体反应*左右二孔抗原性质相同，但右孔浓度过大，产生抗原抗体复合物逐渐溶解的“假刺”现象在抗原抗体多种体系中沉淀线的特征(二)左右二孔抗原性质大部分相同，沉淀线融合较多左右二孔抗原性质部分相同，出现部分融合现象返第七章抗原抗体反应*抗血清电泳后在胶中间沿电泳方向开一条槽③免疫电泳：是利用蛋白质在凝胶中电泳迁移率不同能被分离开来的特性与免疫扩散结合一起进行分析的方法。继续第七章抗原抗体反应*火箭电泳：单相免疫扩散与电泳结合的一种方法。继续*DEAE-纤维素DEAEcelluloseDEAE-纤维素DEAEcellulose为二乙氨乙基纤维素。是阴离子交换纤维素之一。DEAE—纤维素的活化：称取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸馏水浸泡过夜，观察溶胀后DEAE的体积。根据所需层析柱的柱床体积计算所需DEAE的用量，称取所需DEAE用蒸馏水浸泡过夜，其间换几次水，每次除去细小颗粒。抽干，改用0.5ml/LNaOH溶液浸泡1h以上，抽干（可用布氏漏斗），用无离子水漂洗，使pH至8左右（用pH试纸检查）。再改用0.5ml/LHCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用无离子水洗至pH6左右。本实验中在用前应以0.0175mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲液，浸泡平衡后使用。用过的离子交换剂可以反复使用，使其恢复原状的方法俗称“再生”。再生并非每次用酸、碱反复处理，通常只要“转型”处理即可。所谓转型就是使交换剂带上所希望的某种离子，如希望阳离子交换剂带上NH+4则可用NH4OH浸泡，如希望阴离子交换剂带上Cl—则用NaCl溶液处理。本实验中DEAE—纤维素在酸碱处理后，用0.0175mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲溶液浸泡即可转型，以HPO4取代DEAE中的OH—。一般由于DEAE—纤维素使用后因带有大量杂蛋白，所以再生时，先用0.5ml/LNaOH浸洗，用无离子洗至pH8左右，再转型，即可再使用。*聚乙二醇(PEG)近代微生物细胞融合技术中常被用作细胞融合剂（分子量1000~4000）*范德华力是存在于分子间的一种吸引力，它比化学键弱得多。一般来说，某物质的范德华力越大，则它的熔点、沸点就越高。对于组成和结构相似的物质，范德华力一般随着相对分子质量的增大而增强。与负电性大的原子X（氟、氯、氧、氮等）共价结合的氢，如与负电性大的原子Y（与X相同的也可以）接近，在X与Y之间以氢为媒介，生成X-H…Y形的键。这种键称为氢键。又称离子键，是蛋白质分子中正、负电荷的侧链基团互相接近，通过静电吸引而形成的，如羧基和氨基、胍基、咪唑基等基团之间的作用力。

非极性分子之间的一种弱的、非共价的相互作用。这些非极性分子（如一些中性氨基酸残基，也称之疏水残基）在水相环境中具有避开水而相互聚集的倾向。

非极性分子之间的一种弱的、非共价的相互作用。这些非极性分子（如一些中性氨基酸残基，也称之疏水残基）在水相环境中具有避开水而相互聚集的倾向。

非极性分子之间的一种弱的、非共价的相互作用。这些非极性分子（如一些中性氨基酸残基，也称之疏水残基）在水相环境中具有避开水而相互聚集的倾向。

第七章抗原抗体反应*第七章抗原抗体反应及应用一节﹑抗体的制备二节﹑抗原抗体反应三节﹑抗原抗体反应的应用第七章抗原抗体反应*一节﹑抗体的制备一﹑抗血清的制备及抗体纯化二﹑单克隆抗体的制备三﹑抗体工程四﹑催化性抗体五﹑抗体在抗肿瘤治疗中的应用继续第七章抗原抗体反应*一﹑抗血清的制备及抗体纯化1、抗血清的制备抗血清：含有能与相应抗原结合的抗体分子的免疫动物血清。③抗血清的纯化见下图①免疫动物抗原(半抗原需经转化)佐剂乳化免疫动物②抗血清的制备抗血清的效价测定采血获得抗血清第七章抗原抗体反应*抗血清+3倍体积0℃ddH2O,调pH到7.7加50%-20℃酒精至最后质量分数为20%(保持-5℃)上清沉淀(含IgG/IgA/IgM/杂蛋白)悬浮于0.015-0.02mo