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基于液相色谱-飞行时间质谱的白花龙叶化学成分分析

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欧阳胜祥姚文华唐熙麟李青朱庆妮黄睿陈彦斌金威龙飞

摘要通过液相色谱-飞行时间质谱联用技术定性分析白花龙叶甲醇提取物中的化学成分，为白花龙叶的进一步研究和开发提供依据。色谱分离采用C18色谱柱（1.8μm，2.1mm×100mm），以0.2%甲酸-乙腈为流动相梯度洗脱，流速0.3mL·min-1，质谱定性采用飞行时间质谱，正负离子模式扫描。结果：从白花龙叶中鉴定出54种化合物，其中黄酮类9种，有机酸类9种，酯类4种，糖类5种，氨基酸7种，香豆素类6种，木脂素类6种，酚类3种，醛类、苯丙酸类、萜类、苷类和维生素类各1种。针对白花龙叶，本研究建立了一种基于LC-ESI-TOF-MS/MS技术分析鉴定其化学成分的方法，发现含有许多对人体有保健功能的成分。

关键词白花龙叶;液相色谱-飞行时间质谱;化学成分

：Q501文献标志码：ADOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.01.001

白花龙（StyraxfaberiPerk.）为安息香科安息香属植物，主要分布于我国长江流域以南各省区，生长在海拔100～600m的低山区和丘陵灌丛中[1]。

湖南郴州、岳阳等地人们常用白花龙叶当茶饮，饮用历史达百年之久。已有的研究表明，安息香属植物的花、叶、果均可入药，具有清热解毒、开窍行气、活血止痛的作用，可治疗风湿关节炎、胃痛等[2]，并对预防皮肤衰老和治疗皮肤癌等有重要作用[3]，其叶对镉的去除也有明显效果[4]。目前白花龙多为野生，对于白花龙叶中所含有的具体化学成分尚未见系统的文献报道[5]，也一直未被深度开发利用。对白花龙叶片中的化学成分进行研究，有利于充分开发这一植物资源在饮用和药用方面的价值。本研究采用液相色谱-三重四级杆/飞行时间高分辨质谱联用技术对白花龙叶片的化学成分进行定性分析，旨在为白花龙叶的进一步研究和开发提供依据。

1材料与方法

1.1实验材料

野生白花龙树叶，经杀青、晒干制得。

1.2仪器与试剂

AB5600+三重四级杆飞行时间质谱仪（美国ABSciex公司）;岛津LC-30A液相色谱仪;高速低温离心机（Sigma公司）;NC1500-T非接触式超声波处理器（上海欧河机械设备有限公司）。甲酸、乙腈为HPLC级，其他试剂为分析纯，具体制备方法参照王军[6]、李嘉蓉[7]等人的文献。

1.3色谱条件

色谱柱为C18（1.8μm，2.1mm×100mm）;柱温为35℃;流速为0.3mL·min-1;进样量为5μL;流动相采用乙腈-0.2%甲酸水溶液的梯度洗脱程序（见表1）。

1.4质谱条件

离子化模式为电喷雾正离子模式，离子源电压5500V，离子源温度600℃，去簇电压（DP）100V，碰撞能量（CE）35eV，碰撞能量擴展（CES）为15eV。雾化气体为氮气，辅助气1为60PSI，辅助气2为50PSI，气帘气为40PSI。一级质谱母离子扫描范围为50～1000，在IDA设置响应值超过100cps的6个最高峰进行二级质谱扫描，子离子扫描范围为50～1000，开启动态背景扣除（DBS）。

离子化模式为电喷雾负离子模式，离子源电压-4500V，离子源温度500℃，去簇电压（DP）100V，碰撞能量（CE）-35eV，碰撞能量扩展（CES）为15eV。雾化气体为氮气，辅助气1为60PSI，辅助气2为50PSI，气帘气为40PSI。一级质谱母离子扫描范围为50～1000，在IDA设置响应值超过100cps的6个最高峰进行二级质谱扫描，子离子扫描范围为50～1000，开启动态背景扣除（DBS）。

1.5供试品制备方法

取白花龙干燥叶片粉碎得粉末，取粉末0.5g于10mL玻璃试管内，加入5mL50%甲醇-水溶液浸泡4h，然后40℃超声40min;取此中药提取液2mL于2mL离心管内，以2000r·min-1低温（4℃）离心10min，过0.22μm微孔滤膜后装入1.5mL自动进样瓶，得到中药提取物样品。同样条件得到空白对照样品。将样品放入4℃冰箱保存，在分析前取出（保存时间不能超过24h）。

1.6数据分析方法

通过文献调研，查找了文献报道的安息香科植物常见化学成分及植物常见萜类、酚酸类、黄酮类、蒽醌类、脂肪酸类、生物碱类、木脂素、香豆素类、苷

类、维生素及氨基酸等化学成分，采用液相色谱-三重四级杆-飞行时间高分辨质谱联用技术，将所获得的化合物精确分子质量、碎片离子峰、色谱保留时间与数据库中的化学成分进行匹配，并结合METLIN数据库和HMDB数据库，定性分析白花龙叶的化学成分。

2结果与分析