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新型丙型肝炎病毒重组体在Huh7细胞系中复制研究
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（1贵州医科大学附属医院消化内科贵州贵阳550004）
（2中山大学人类病毒学研究所广东广州510080）
【摘要】目的：研究HCV重组体J6/JFH1在Huh7细胞中复制并产生感染性病毒颗粒。方法：将HCVRNA转染至Huh7细胞中，待转染效率达80%左右，收集上清液，感染新的Huh7细胞，得到的病毒命名为一代病毒，取一代病毒感染效率达80%左右的上清液，感染新的Huh7细胞，得到的病毒命名为二代病毒，测定转染与2次感染收集病毒的滴度。结果：在将HCV病毒转染和感染Huh7细胞后，HCV阳性细胞达80%的时间分别是第13天、第5天及第5天，三次最高滴度分别是3.9FFU/ml,4.5FFU/ml及4.6FFU/ml。结论：成功在Huh7细胞内培育出带有适应性突变的J6/JFH1病毒，为HCV体外培育提供了新思路，为耐IFN的丙肝治疗奠定了基础。
【关键词】HCV；Huh7细胞；IFN
【中图分类号】R394【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）30-0025-04
NewrecombinanthepatitiscvirusreplicationstudyinHuh7cellline
HanLou,ZhangYonghong(correspondingauthor).AffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,GuizhouProvince,Guiyang550004,China;ZhangXue,zhangHui.SunYat-senUniversityInstituteofHumanVirology,GuangdongProvince,Guangzhou510080,China
【Abstract】ObjectiveStudyofHCVrecombinantJ6/JFH1inHuh7cellscopyandproducetheinfectiousvirusparticles.MethodsHCVRNAtransfectiontoHuh7cells,afterwaitingfortransfectionefficiencyupto80%orso,clearfluidcollection,newHuh7cellsofinfection,thevirusnamedgeneration,fromagenerationofvirusinfectionefficiencyabout80%supernatant,newHuh7cellsofinfection,thevirusnamedthesecondgeneration,determinationoftransfectionwithtwocollectedvirusdrops.ResultsTheHCVvirustransfectionandHuh7cellsafterinfection,HCVpositivecellsreached80%ofthetimeis13days,5daysand5days,threetimesthehighestdropdegreesarerespectively3.9head/ml,4.5head/head/mland4.6ml.ConclusionsSuccessinHuh7cellsproducedwithadaptivemutationsJ6/JFH1virus,forHCVinvitrocultivationprovidesanewtrainofthought,whichlaidafoundationforhepatitisctreatmentofIFNresistance.
【Keywords】HCV.Huh7cells;IFN
丙型肝炎病毒（HCV）是一个全长9.6kb的单链正义RNA病毒，属于黄病毒科（Flaviviridae），丙型肝炎病毒属(Hepacivirus)。肝细胞是HCV最主要的靶细胞，约80%的丙型肝炎感染者会转为慢性感染，部分感染可发展为慢性活动性肝炎，肝硬化和肝癌。全世界约有大于1.7亿人慢性感染HCV[1]。丙肝已经成为公众健康的一大主要问题。
Huh7细胞是来源于肝癌细胞，能稳定产生IFN，不适合用作为HCV体外培养细胞。Blight等人用IFN-β预处理了含有Con1复制子的Huh7的细胞，得到的存活的细胞，命名为Huh7.5细胞。由于Huh7.5细胞产生IFN-β量较Huh7细胞少，可更高效的支持HCV复制[2,3]。
HCV于1989年被发现，但直到1999年，才建立了第一个HCV细胞内复制系统，简称复制子（re
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