实训指导-灭菌（果酒微生物检测）.docVIP

自制果酒中微生物的检测

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实训指导

实训内容

高压灭菌锅的使用

实训

目的

与

要求

目的：

（1）了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围

（2）熟练掌握高压蒸汽灭菌的操作方法及注意事项

要求：

（1）每人均会使用高压灭菌锅

（2）完成实训报告一份

实训

原理

高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加热灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。

实训

过程

一、实训材料与试剂

LB培养基

其他

培养皿、试管、三角瓶、移液管，高压蒸汽灭菌锅

灭菌锅的构造

操作步骤

加水

将内层锅取出，再向外层锅内缓慢加入适量的水使水。（未加水时灭菌锅会报警，当水加到适宜的水位后会停止报警）。

装锅

放回内层锅，并装入待灭菌物品。

加盖

将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。（本次使用的高压灭菌锅，当盖上盖子时会自动锁住，直至消毒结束后才可打开，故在锁盖之前务必放入所有需要灭菌的物品）。

加热、排气

打开放气阀，同时接通电源，进行加热，待锅内水沸腾并有大量水蒸气从排气阀冒出时，维持3-5min以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。

保温保压

当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。

出锅

灭菌所需的时间到后，关闭电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表降至“0”时，温度下降到70摄氏度时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。

保养

灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，以保持内壁及内胆干燥，盖好锅盖。

无菌检查

将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h，经检查若无杂菌生长，即可待用。

结果

与

分析

（一）注意事项

1．切勿忘记加水，同时加水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。

2．压力一定要降到“0”时，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。

（二）思考题

1．高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待压力降低为“0”时才能打开排气阀，开盖取物？

2.怎样检查培养基灭菌是否彻底？

3.在使用高压蒸汽灭菌锅时，怎样杜绝不安全的因素？