肺炎链球菌荚膜教学标本的制作方法研究.docxVIP

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肺炎链球菌荚膜教学标本的制作方法研究

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王燕曾燏张富斌

[摘要]目的探索并優化肺炎链球菌荚膜教学标本片的制作条件和染色过程，以期找到适合我校荚膜教学标本片需求的制作和保存方法，提升微生物实验课堂的教学质量。方法将肺炎链球菌传代活化后制成悬液，以腹腔注射法（0.2ml悬液）感染10只昆明小鼠并传代培养，提取发病待濒死小鼠的腹腔液涂片，分别使用石炭酸复红染色法和改良Hiss荚膜染色法对其进行染色，从菌体形态、数量、荚膜大小、染色效果等方面综合比较两种染色方法的差异。最后将镜检合格的标本用中性树胶封固，贴上标签后保存备用。于2018年12月，抽查我校2017年12月使用改良Hiss荚膜染色法所染制的35片标本片，评估标本片的质量。结果随着传代的进行，受染小鼠体内的肺炎链球菌增多，荚膜增大。传代两次即可见宽大的荚膜，且第二次传代感染实验小鼠的发病时间明显缩短，两次感染发病时间分别为10～12h和8～10h。同传统的石炭酸复红染色法比较，改良Hiss荚膜染色法所染制的标本，背景均匀，染料颗粒少，菌体呈现深紫色，同淡紫色背景对比明显。同时，抽查已保存1年的改良Hiss荚膜染色法所染制的标本共35片，抽查结果表明，改良Hiss荚膜染色法制作、保存的标本荚膜仍清晰可见，无褪色和霉变现象，标本片完好率达到100%。结论在实际教学中，小鼠体内传代两次即可观察到明显的荚膜，改良Hiss荚膜染色法的染色效果优于传统的石炭酸复红染色法，且封片保存的标本可反复多次使用，能满足我校教学需要。

[关键词]肺炎链球菌;荚膜;石炭酸复红染色;改良Hiss荚膜染色法;实验教学

[]R378.12?????[]A?????[]1674-4721（2019）12（c）-0025-04

[Abstract]ObjectiveToexploreandoptimizethepreparationconditionsanddyeingprocessofmakingstreptococcuspneumoniaecapsuleteachingspecimens，inordertofindthemostsuitablepreparationandpreservationmethodsfortherequirementsofmakingandpreservingcapsuleteachingspecimensofourschool，soastoeventuallyimprovethequalityofexperimentalteachingclassinMicrobiology.MethodsTomakethesuspensionofstreptococcuspneumoniaefollowedtheprocessofsubcultureandactivation，tenKunmingmicewereinfectedbyintraperitonealinjection（0.2mlsuspension）andsubcultured.Peritonealfluidofmicewereextractedbeforethemicedyingforsmear，andcarbonicacidcomplexredstainingandmodifiedHisscapsulestainingwereusedtostainthecapsules，respectively.ThedifferencesbetweenthetwostainingmethodswerecomparedbetweenthecarbonicacidcomplexredstainingandmodifiedHisscapsulestainingintermsofmorphology，quantity，capsulesizeanddyeingeffect.Finally，thequalifiedspecimensweresealedwithneutralgum，labeledandstoredforfutureuse.InDecember2018，35specimensdyedbythemodifiedHisscapsulestainingmethodinDecember2017，weresampledtoevalua