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TCID50和PFU的换算公式--第1页
1、PFU:plaqueformingunit,空斑形成单位:感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。由
于测定pfu往往重复性较差,因此近些年许多研究又开始采用TCID50方法来计算病毒的感
染单位。因此建议也可使用TCID50法。
2、MOI:multiplicityofinfection,感染复数:传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的
研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值,也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。
噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值,没有单位,其实其隐含的单位是pfu
number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中,含义是感染时病毒与细胞数量
的比值。
然而,由于病毒的数量单位有不同的表示方式,从而使MOI产生了不同的含义。能产生
细胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量,因此其MOI的含
义与传统的概念相同。传统意义上的MOI的测定,其原理是基于病毒感染细胞是一种随机
事件,遵循Poisson分布规律,可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数(MOI)。
其公式为:
P=1-P(0),P(0)=e-m或m=-InP(0)。
其中:
P为被感染细胞的百分率
P(0)为未被感染细胞的百分率
m为MOI值
例如,如果要感染培养皿中99%的培养细胞,则:
P(0)=1%=0.01
m=-In(0.01)=4.6pfu/cell。
(一)原理病毒感染细胞后,由于固体介质的限制,释放的病毒只能由最初感染的细胞向
周边扩展。经过几个增殖周期,便形成一个局限性病变细胞区,此即病毒蚀斑。从理
论上讲,一个蚀斑是由最初感染细胞的一个病毒颗粒形成的,因而该项技术常用于病
毒颗粒计数和分离病毒克隆。但在实际操作中,常出现几个病毒颗粒同时感染一个细
胞的情况,影响滴定的准确性和克隆的纯一性,为此,接种的病毒液要充分分散和稀
释。对于细胞结合性病毒,如MDV,需用单层细胞;对细胞释放性病毒,即可用固相
介质悬浮的细胞,也可用单层细胞,但后者需用琼脂等固体介质盖在细胞上,以防释
放的病毒在液体介质中流动。固体介质的浓度由病毒的大小而定,大病毒用浓度较低
的介质,小病毒用浓度较高的介质,以便将蚀斑的生长速度控制在适宜的范围内。小
蚀斑需用显微镜观察,1-10mm的大蚀斑可用肉眼计数。为便于肉眼观察,常用中性红
等染料染色。因病变细胞不吸收中性红,病变细胞区便呈现无色蚀斑。病毒悬液的滴
度以每毫升蚀斑形成单位(PFU/ml)来表示。例如,3个细胞瓶的平均蚀斑是58,接种量
335
为0.2ml,病毒的稀释度为2.5×10,则病毒原液的滴度为:58÷0.2×2.5×=107.25×10
(PFU/ml)
PFUs=0.7×TCID50的滴度
(二)技术应用蚀斑技术可以应用于分离病毒的克隆(无性繁殖纯系)、病毒或血清的滴
定,也可用蚀斑形态和大小研究病毒的生物学特性。
TCID50和PFU的换算公式--第1页
TCID50和PFU的换算公式--第2页
1.病毒生物学纯化(Virusbiologicalpurification)在进行血清中和试验时,常常会出现标
准病毒株的滴度下降,因而影响了试验的准确性,这种情况多见于虫煤病毒。这可能是
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