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巴氏杆菌诊断技术研究进展

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许泽芳+谢永兴+郭树源+赵翠+常维山

摘要：本文主要对巴氏杆菌当前比较流行的诊断技术进行了汇总，并且引用了当前国内外的一些研究成果并进行了分析。对该菌的分子生物学诊断技术的灵敏度和特异性进行了介绍，对此病原菌的实验室研究提供了多种方法，最后展望了其分子生物学方法应用于实践的前景和存在的问题，为进一步开展基础研究提供了思路。

关键词：巴氏杆菌;诊断技术;应用

：S854.4???：A???：1673-1085（2015）03-0038-04

巴氏杆菌病（Pastenrellosis）是由巴氏杆菌属细菌引起畜禽共患的一种急性传染病，主要是由多杀性巴氏杆菌引起，发生于各种家畜、家禽、野生动物和人类的一种传染病的总称。本病为世界性分布，近年来，由于饲养环境恶劣、药物的滥用、继发感染或动物机体自身的抵抗力低下等原因，巴氏杆菌的感染病例数量及感染物种不断扩大，关于野生动物的病例报道也很多[1]。患病动物急性病例往往以败血症和炎性出血过程为主要特征，慢性经过时则表现为皮下组织、关节、各脏器的局灶性化脓性炎症。在兽医临床上，以由多杀性巴氏杆菌感染引起的禽霍乱、猪肺疫、牛出血性败血症以及由溶血性巴氏杆菌某些亚型引起的羊的溶血性巴氏杆菌败血症等最为多见。

根据Bengeys细菌学鉴定手册，引起巴氏杆菌病的病原主要有4种，即多杀性巴氏杆菌（P.multocida）、溶血性巴氏杆菌（P.heamolytica）、嗜肺巴氏杆菌（P.pneumotropica）和脲巴氏杆菌（P.ureae）等[2，3]。本属细菌除致病作用和血清型不同外，其形态和培养特性几乎完全一致。

应用常规的诊断方法诊断巴氏杆菌虽然具有许多优点，但由于多杀性巴氏杆菌抵抗力不强，在直射阳光、干燥、无菌蒸馏水和生理盐水中迅速死亡，且诊断时存在费时、费力、敏感性低、漏诊、误诊的缺点，应该寻找新的诊断技术，利用现代科学技术为养殖户挽回损失。随着分子生物技术的不断应用和发展，现代分子生物学技术如核酸杂交技术、聚合酶链式反应（PCR）技术、限制性片段长度多态性分析（RFLP）、核苷酸序列分析和基因芯片等，将在疾病的准确、快速诊断中扮演重要角色。

1?病原学诊断

巴氏杆菌正常存在于多种健康动物的口腔和咽部黏膜，当动物处于应激状态，机体抵抗力低下时，细菌容易侵入体内，大量繁殖并致病，发生内源性传染。因此掌握一些基本的诊断技术是相当关键的，特别是依靠一些普通的实验微生物诊断技术尤为关键。

1.1?巴氏杆菌的分离培养?分离培养可用患病动物的组织、肝脏等新鲜病料，接种于鲜血琼脂平板、马丁氏血清琼脂平板、麦康凯琼脂平板和血清肉汤培养基等营养物质高的培养基上，马丁氏血清琼脂平板上菌落微隆起、呈圆形、灰白色露滴状，中等大小。在血琼脂平板上长成水滴样小菌落，溶血性巴氏杆菌出现溶血，但多次传代后溶血性也会消失，多杀性巴氏杆菌则无溶血环。在血清肉汤中培养，开始轻度浑浊，4～6h后液体变清亮，管底部出现粘稠沉淀，震摇后不分散，表面形成菌环。巴氏杆菌在麦康凯琼脂上生长缓慢甚至不生长，菌落为红色。在本属中，多杀性巴氏杆菌是危害畜、禽最为严重的一种，从患病的动物体液或组织中分离培养得到的菌落基本上分为两种：一种为通过45°折光，在低倍显微镜下呈现鲜明的蓝绿色而带金光，边缘有狭窄的红黄色带的Fg菌落型，相当于血清型乙型。对小白鼠、家兔和猪毒力强大，每只注射活菌10～200个即可致死，而对家禽每只必须注射10个以上才可致死;另一种为在45°折光下，菌落呈现橘红色，边缘稍带狭窄的黄绿光的FO菌落型，相当于血清型甲型。对鸡、鸽毒力强大，对猪的毒力较次，家兔对两型的致死量无甚差异。在中国，牛、猪、驴和马的多杀性巴氏杆菌病绝大多数为Fg型菌所致，家禽流行性巴氏杆菌病都是FO型菌所致。慢性病例中偶尔发现菌落较小、折光下呈现淡蓝色的菌落。自病兔分离的菌落也都是FO型。

1.2?巴氏杆菌的染色与镜检?将患病动物的组织渗出液、肝、脾、淋巴结、骨髓等新鲜组织涂片或制作成触片，用瑞氏染色液或碱性美兰液染色，五分钟后放在油镜下镜检，能够发现典型的两极浓染的短杆菌，即菌体两端染色深，中间浅，无鞭毛，不形成芽孢，用印度墨汁等染料染色，可见清晰的荚膜，就可以初步诊断为巴氏杆菌感染。纯培养物进行革兰氏染色、镜检，可见紫红色且两端钝圆的革兰氏阴性球杆状或短杆状菌。

1.3?巴氏杆菌的生化试验鉴定?多杀性巴氏杆菌在48h内可分解葡萄糖、果糖、单奶糖、蔗糖和甘露糖，产酸不产气。一般不发酵乳糖、鼠李糖、菊糖、水杨苷和肌醇，可产生硫化氢，能形成靛基质，M.R.和V-P试验均为阴性。接触酶和氧化酶试验均为阳性。溶血性巴氏杆菌不产生靛基质，能发酵乳糖产酸，能发酵葡萄糖、糖元、肌醇、麦