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·1596·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Nov；52(11)

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流式细胞术分选小鼠肺泡巨噬细胞及鉴定

韩鑫涛，赵殿元，唐丽

摘要目的建立一种基于流式细胞术分离小鼠肺泡巨噬功能

细胞(AM)的方法。方法小鼠肺脏在体外经胶原酶IV消中图分类号R392．12

化后获得单细胞悬液，再经CD11b和CD11C抗体标记，利用文献标志码A文章编号1000—1492(2017)11—1596—05

流式细胞仪分选获得CD11blowCD11CAM，并经台盼蓝染色doi：10．19405／j．cnki．issnl000—1492．2017．11．004

计数细胞活力，以及通过Real—timePCR和吞噬功能进行鉴

定。结果流式细胞术分选小鼠肺脏单细胞悬液，获得肺泡巨噬细胞(alveolarmacrophage，AM)是肺

CD11blOWCD11c细胞，纯度为(93±2)％，细胞活力为(80±脏定居的巨噬细胞，正常情况下，占肺泡内细胞总数

5)％；Real—timePCR结果显示过氧化物酶体增殖物激活受的90％一95％_1J。在胚胎发育期，单核细胞进入胚

体(PPA)在该群细胞高表达(P0．001)；细胞吞噬功胎肺，分化为AM，并通过不断增殖完成自我更

能实验结果显示该群细胞具有较好的吞噬活性，吞噬率约为新。不同于腹腔、肝脏、脑、心脏等组织定居的

10％。结论建立了一种基于流式细胞术分选获得AM的

巨噬细胞，AM特异表达过氧化物酶体增殖物激活

方法，该方法获得的细胞纯度高，细胞活性好，可用于功能性

受体^y(peroxisomeproliferator—activatedreceptor^y，

实验。

关键词肺泡巨噬细胞；流式细胞术；Real—timePCR；吞噬PPARy)转录因子，在AM的分化和组织特异性形成

中发挥重要作用J。作为诱导型表达的基因，

2017—07—17接收PPARy受肺泡上皮细胞产生并进入肺泡微环境的

基金项目：国家自然科学基金(编号81500428)粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子调控j，而且

作者单位：安徽医科大学，合肥230032PPAR~／表达异常通常与某些疾病有关，如肺泡蛋白

军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京100850

沉着症患者中PPAR-y的表达丢失。此外，AM处

蛋白质组学国家重点实验室，北京102206

于一种独特微环境，在肺泡内直接与外部环境接触，

作者简介：韩鑫涛，男，硕士研究生；

唐丽，女，研究员，博士生导师，责任作者，E—mail：tan—因而具备高吞噬活性，从而能迅速清除来自于呼吸

gli731@163．corn道的颗粒抗原和“短命”上皮细胞，在肺脏免疫稳态

DNAwasextractedrfomHepG2cells，then937，667，553and399bpfragmentsbe