蛋白质的修饰和表达课件.pptxVIP

蛋白质的修饰和表达;第一节蛋白质修饰的化学途径;一、功能基团的特异性修饰;一、功能基团的特异性修饰;1．多位点取代;2．限制性取代;3．次级取代;二、基于蛋白质片段的嵌合修饰;二、基于蛋白质片段的嵌合修饰;第二节蛋白质改造的分子生物学途径;基因突变技术是通过在基因水平上对其编码的蛋白质分子进行改造，在其表达后用来研究蛋白质结构功能的一种方法。

根据其特点，可将基因突变分为两大类：位点特异性突变和随机突变。

位点特异性突变又可大体分为三种类型：一类是通过寡核苷酸介导的基因突变；第二类是盒式突变或片段取代突变；第三类是利用聚合酶链反应(PCR)，以双链DNA为模板进行的基因突变。

可以这样说，PCR技术的出现为基因的突变，基因的剪接开辟了一条极其有效、极其快捷的道路。当然无论哪种方法都可以在为蛋白质编码的基因序列上产生插入、缺失、取代等突变。;1．编码基因的专一性位点突变;(2)几种寡核苷酸介导的基因突变方法;2．区域性定向突变;研究目的;二、基因融合和基因剪接;基因融合的用途;第三节重组蛋白质的表达;一、大肠杆菌中表达体系的优点;大肠杆菌表达体系的缺点;大肠杆菌表达体系的应用;1．表达载体的一般特点;2．与外源基因有效表达的相关因素;3．改善表达水平的方法;4.改善外源蛋白溶解性的方法;

二、目标蛋白质在酵母细胞中的表达

有关酵母表达载体的复制、转录、筛选元件

外源mRNA在酵母细胞中的翻译

3.?外源蛋白质在酵母中的分泌表达

4.???翻译后修饰

;二、目标蛋白质在酵母细胞中的表达

;三、重组蛋白质在哺乳动物细胞中的表达;1．哺乳动物细胞表达体系的优点;分泌型哺乳动物细胞表达系统;哺乳类动物细胞表达体系的另一个用处;2．两个主要的哺乳动物细胞表达系统;其他表达系统;四、噬菌体显示(Phagedisplay);