柔红霉素在MOLT-4细胞中的药物作用及不同噻唑蓝法比较.docx

??

?

??

柔红霉素在MOLT-4细胞中的药物作用及不同噻唑蓝法比较

?

?

?

?

?

??

?

?

?

摘要：目的：通过柔红霉素在MOLT-4细胞中的药物作用及不同噻唑蓝法比较，研究道中道（菏泽）制药公司和医院合作研究柔红霉素对病人的治疗效果。方法：分别使用传统的MTT方法以及改良版本的MTT方法来检测在不同药物浓度当中的MOLT-4细胞的存活率。结果：通过研究可以发现，使用改良的MTT方法检测出的变异指数比较低，在0-0.2左右，而如果使用传统的MTT方法来进行检测的话那么其中的变异指数相对较高，处在0.2-0.6的范围内。结论：改良的MTT方法明显优于传统的MTT方法，柔红霉素对于MOLT-4细胞的增殖具有抑制的作用。

关键词：柔红霉素MOLT-4细胞药物作用噻唑蓝法比较

前言：

道中道（菏泽）制药有限公司现主要生产和开发产品有抗肿瘤类非无菌原料药五个；免疫抑制剂及抗肿瘤产品两个；另开发有抗真菌类产品两个；在生产的5个产品，主要集中在抗肿瘤产品方面。公司产品生产技术和菌种来源为欧洲引进，经蒽环类微生物制药工程实验室研究开发，涵盖生物发酵、提取、精制及合成领域；最终产品为盐酸柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星和盐酸伊达比星,产品主要用于恶性淋巴肿瘤、肺癌、小儿恶性淋巴癌、乳腺癌、白血病等疾病的化疗。柔红霉素，又被称为DNR，是目前社会当中被用来治疗白血病的一种重要的药物。噻唑蓝染色法，又称为MTT，这种方法是一种用来检测细胞的活力以及细胞状态的方法，这种方法不仅操作简便，而且具有很高的经济效益，并且见效的速度较快，适合用来作为实验的方法。

材料与方法

材料

1、盐酸柔红霉素主要成分

本产品是Str.peucetius或Str.coeruleorubidus菌种所产生的抗生素，它与ADM都具有一个蒽环平面，可通过它嵌合于DNA碱基对之间并紧密地结合到DNA上，因而使核酸中含有相当高浓度的药物，这种嵌合可导致DNA空间结构的障碍，从而抑制DNA及DNA依赖的RNA合成，对RNA的影响尤为明显，并可选择性作用于嘌呤核苷。本品虽为细胞周期非特异性药物，对增殖细胞各期均有杀伤作用，但对G2作用更为显著。

在本实验当中使用到的材料有RPMI-1640培养基、胎牛血清、MTT以及二甲基亚砜等等。

溶液以及配制的方法

DNR贮存液：20ml的生理盐水溶解在20mg的DNR中，从而来配成浓度为1g/L的溶液，雷公藤以及盐酸小劈碱加入无水乙醇溶解配制成1g/L的溶液，并且使用到了0.22微米的微孔滤网过滤膜来进行过滤，分装在零下二十度进行保存。

方法

细胞培养

将MOLT-4细胞放置在含有10%浓度的胎牛血清以及青霉素和链霉素的培养基当中进行培养，周围的环境温度控制在37摄氏度，二氧化碳的浓度控制在5%左右；

MTT方法

将5X10^5/ML浓度的溶液接种在96孔板当中，并且保持每个孔的含量在180微升，在其生长了12个小时过后加入20微升的药物，从而配制成浓度为1mg/L的DNR溶液。

统计学处理

本实验对得到的有效数据进行处理的方式采取的是SPSS11.5统计软件来进行处理的。

结果

2.1在两个组使用了不同的MTT方法得到的不同结果由图一所示：

2.2经过使用改良版本的MTT方法得出的细胞的存活率如表1所示：

通过分析表1当中的数据可以看出：DNR以及盐酸小劈碱在单独作用了24和36小时之后与对照组之间有着明显的差距，另外，两个组别共同作用24小时之间也存在着明显的差异，如果仅仅只是使用雷公藤来单独作用36小时的话也是存在差异的，同样，雷公藤和DNR共同作用24小时也是存在差异的，具体的差距如图2所示：

讨论

经过本公司和医院进行长时间的合作研究发现，雷公藤其实是由公藤根经过一系列的去皮、粉碎以及提取然后再精炼而成的，具有抗炎、免疫以及抗生育的作用，近年来还发现在抗击肿瘤方面也同样存在着一定的作用。经过一些专业人员的长期调查和研究发现，雷公藤可以诱导HL-60细胞的凋亡，而且还发现主要是作用在细胞的分裂时期。小劈碱属于一种生物碱，之前主要是被运用在了肠道消化问题方面，后来同样经过研究发现它对于抗肿瘤有着强烈的抑制的作用，另外，小劈碱的抗肿瘤作用是通过激活淋巴细胞的DNA合成作用来完成和实现的。经过合作研究发现对病人有着如下的治疗效果：DNR是当今社会目前运用于治疗白血病的最主要的药物，它的药物作用除了可以通过和靶细胞直接作用之外，还可以通过诱导细胞凋亡来起到一个抑制肿瘤细胞的作用。然而，是药三分毒，随着药材含量在体内的积累，会对人的身体产生一定的负面影响，尤其是针对于一些患有急性的白血病患者的心脏的毒性会大大增强。上文也提到过，雷公藤和小劈碱也同样经过研究发现了对肿瘤细胞也有着一定