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2024-09-09 发布于湖北
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桑皮止咳颗粒剂对咳嗽变异性哮喘豚鼠血清和肺泡灌洗液中组胺和白三烯含量的影响.docx

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桑皮止咳颗粒剂对咳嗽变异性哮喘豚鼠血清和肺泡灌洗液中组胺和白三烯含量的影响

3.沈阳市儿童医院辽宁沈阳110032）

摘要：目的探讨桑皮止咳颗粒剂对咳嗽变异性哮喘豚鼠血清和肺泡灌洗（BALF）中组胺和白三烯水平的影响。方法将48只豚鼠随机分为：正常组、模型对照组、西药对照组及桑皮止咳颗粒剂低、中、高剂量组，共6组，每组各8只。通过卵蛋白腹腔注射致敏和雾化吸入激发咳嗽复制咳嗽变异性哮喘的豚鼠模型。观察豚鼠的血清和BALF中组胺和白三烯的水平。结果模型组血清及BALF中组胺和白三烯含量明显高于其它各组，差异有统计学意义（P0.05）；西药组、止咳剂中、高剂量组相互之间组胺和白三烯含量差异无统计学意义（P0.05），但是止咳剂低剂量和西药组及中、高剂量组中组胺和白三烯含量差异有统计学意义（P0.05）。结论桑皮止咳颗粒剂能有效的缓解气道炎症反应，可能与参与免疫调节的炎症介质组胺和白三烯的水平有关，但需要达到足够的剂量时才能更为有效的发挥作用。

关键词：桑皮止咳颗粒剂；咳嗽变异性哮喘；组胺；白三烯

咳嗽变异性哮喘，又称过敏性咳嗽（coughvariantasthma，CVA），是指以咳嗽为主要或唯一临床表现的一种特殊类型的哮喘，在学龄前和学龄期儿童慢性咳嗽中十分常见。而中医认为其病机与“哮证”相似，是一种介于外感和内伤之间的虚实夹杂性咳嗽。近年来相关资料研究显示，在我国慢性咳嗽病因诊断中有14%为CVA，钟南山等调查发现慢性咳嗽首要病因CVA（29.9%）[1]。桑皮止咳颗粒是《小儿药证直决》中泻白散和《医学心悟》中止咳散合方基础上结合临床经验加减而成，本实验选用桑皮止咳颗粒与本病临床常用西药（孟鲁斯特咀嚼片）在不同剂量下，分别作用不同组别豚鼠进行对比，观察其疗效作用，现将实验汇报如下。

1材料

1.1动物

选用48只健康纯系豚鼠，雄性，SPF级，体重200±20g，购自辽宁长生生物技术有限公司，合格证号：SCXK（辽）2010-0001。

1.2药物及试剂

桑皮止咳颗粒剂（以下为图表中使用方便简称止咳剂），由桑白皮、地骨皮、桔梗、牛蒡子、甘草等药物组成，购自辽宁中医药大学附属医院颗粒药局；孟鲁斯特咀嚼片（顺尔宁），规格10mg/片，杭州默沙东制药有限公司分装，批号：K005999。卵蛋白（OVA），美国Sigma公司生产，＃A5503-1g，纯度98%；氢氧化铝，北京鼎国生物技术有限公司提供，批号：120701；注射用环磷酰胺，山西普德药业股份有限公司生产，批号豚鼠组胺（HA）酶联免疫试剂盒，武汉优尔生生物技术有限公司生产，批号：L141007002；豚鼠白三烯（LTB4）酶联免疫试剂盒，武汉优尔生生物技术有限公司生产，批号：L141007059。

1.3仪器

超声雾化器：型号402AI，江苏鱼跃医疗设备股份有限公司；酶标仪：BENCHMARK，BIO-RAD；高速离心机：TGL-16B，中国。

2方法

2.1分组与造模

将48只豚鼠经适应性喂养3天，平均分为正常对照组、模型对照组、西药对照组、止咳剂低剂量组、止咳剂中剂量组、止咳剂高剂量组，共6组，每组各8只。按文献记载的经典的过敏性咳嗽的造模方法[2]进行造模：正常组在豚鼠腹腔注射同等量的生理盐水，其余各组第1天腹腔注射30mg/Kg的环磷酰胺免疫抑制剂，2天后腹腔注射含有2mg卵蛋白和100mg氢氧化铝的混悬液1ml，3周后再次腹腔注射含有0.01mg卵蛋白和100mg氢氧化铝的混悬液1ml以加强免疫，豚鼠致敏。再3周后给予豚鼠10%的卵蛋白溶液，将其置于4L的玻璃钟罩内，雾化吸入60s激发咳嗽。灌胃期间隔日雾化1次。除正常组外，其余各组均出现呼吸加快、不同程度的咳嗽、腹肌收缩现象，说明本次造模成功。

2.2给药

6周后第1次激发咳嗽后，按照动物剂量换算表计算豚鼠灌胃量，西药组1mg/kg，止咳剂低中高剂量组分别为5g/kg，10g/kg，20g/kg。模型组和正常组灌胃同等剂量的生理盐水，每日灌胃1次，连续10天。

2.3标本采集与检测

用10%的水合氯醛（剂量3.3ml/kg）腹腔注射麻醉各组豚鼠，夹板固定后进行解剖。血清的收集：打开腹腔，进行腹主动脉取血3ml放入采血管中，室温中凝固30min，然后1000g离心10min，收集血清，-20℃冰箱冷冻保存，用于ELISA检测。BALF的收集：打开胸腔，迅速结扎右主支气管，将气管及双肺剪下后，称重，按左肺重量：生理盐水冲洗量=1：2的比例收集肺泡灌洗液，然后2000g离心10min留取上清液，-20℃冰箱冷冻保存，用于ELISA检测。测定豚鼠血清及肺泡灌洗液中组胺和白三烯的含量采用采用双抗夹心法ABC-ELISA法。操作步