HPV基因分型特点与宫颈病变的相关性研究.docx

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HPV基因分型特点与宫颈病变的相关性研究

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摘要：随着人们生活方式以及性观念的转变，妇科许多疾病的发生几率都呈现逐年升高的趋势，而宫颈癌作为妇科常见的恶性肿瘤疾病之一，也尚且如此。根据临床的相关研究发现，人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）是导致HPV感染以及宫颈癌出现的重要因素之一。宫颈病变发展速度较慢，从早期宫颈异常改变发展至宫颈癌需数十年，因此早期进行宫颈病变的检查及治疗对于预防宫颈癌的发生、改善患者预后相当关键。

关键词：HPV基因分型；宫颈病变；关联

1导言

目前，在临床上多采用液基薄层细胞学来进行检查，从而判断受检者的宫颈处是否存在病变组织，达到早期发现、早期预防的目的。随着临床检验技术的发展和进步，HPV基因分型检测也逐渐被应用于宫颈病变组织的筛查中，有学者在此基础上提出，采用TCT联合HPV基因分型检测能够提高检测效率，在预防宫颈癌或者予以早期诊治中，能够起到重要作用。

2资料与方法

2.1研究对象

收集2020年6月—2021年3月广州开发区医院西院区门诊、住院和体检一共6181例女性人乳头瘤病毒基因分型标本，年龄在18～87岁，平均年龄(39.64±8.34)岁。

2.2方法

2.2.1样本要求

检验前准备：①3天内不使用阴道内药物或对阴道进行冲洗；②24小时内不应有性行为；③检查应在非月经期内进行；④检查前阴道不进行醋酸或碘液涂抹。标本采集步骤：由医生以窥阴器暴露宫颈，用棉拭子将宫颈过多的分泌物擦去。将宫颈刷置于宫颈口，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转3～5圈。慢慢取出宫颈刷，将其放入装有细胞保存液的样本管中。在管口处将多余的刷柄折断，将刷头留在样本管中，旋紧管盖，做好样本标示并保持样本管直立放置，送检验室检测。如不能马上送检样本，可置于4℃保存，并于2个星期之内进行检测。

1.2.2试剂与仪器

①试剂：潮州凯普生物化学有限公司生产的核酸提取试剂盒(DNA-L型磁珠法)、人乳头瘤病毒(HPV)分型检测试剂盒(PCR+膜杂交法);②仪器：凯普公司生产的HBNP-480A核酸提取仪、杭州博日生产的TC-96/G/H(b)扩增仪及凯普公司生产的HHM-3、HB2012A、HBHM-3000S杂交仪。

2.3实验方法

将标本经过DNA提取、扩增后进行杂交，肉眼进行判读结果(检测结果阳性点为清晰可见的蓝紫色圆点)。该试剂可检测HPV14种高危型亚型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68亚型),5种低危型亚型(6、11、42、43、44亚型),2种其它亚型(53、CP8304亚型)。

2.4统计学方法

使用SPSS22软件进行统计分析。

3HPV基因分型分析

3.1宫颈癌早期诊断的意义

宫颈癌主要是由HPV感染而引起的一种妇科恶性肿瘤。根据流行病学的调查原理显示，宫颈癌在近年来呈现出了发病年轻化的趋势。对于女性来说，宫颈癌的出现不仅会导致其生活质量明显下降，身体健康受到影响，还会增加其死亡风险，严重威胁患者的健康安全。在我国的癌症防控规划中，已将宫颈癌列为重点的防治对象之一，这也从侧面反映出了大众在预防宫颈癌方面开始加强了重视。随着各地区宫颈癌防治的宣传工作不断开展，人们也提高了疾病预防的意识，在生活中也积极完善相关检查和宫颈癌筛查，在一定程度上也保证了宫颈癌筛查工作的顺利实施。然而，在此基础上，早期诊断的有效率也是我们应当关注的重点。随着临床检测技术的不断进步，越来越多的检测方法被应用到宫颈癌病变的诊断中，以提高宫颈癌的早期诊断率，从而做到早发现、早治疗。为进一步提高宫颈癌的早期诊断率。

3.2HPV基因分型检测

首先，应采用HPV核酸扩增分型检测系统来完成受检者机体HPV亚型基因的检测，检测类型共有21种，包括高危型亚型和低危型亚型这两类。同样，在HPV基因分型检测中，需要将受检者的标本组织从液小瓶中转入微量离心管内，13000r/min，离心5min，在分离后去除上清液，及时保存离心管底中的细胞块。而后，在离心管底部的细胞块中加入裂解液完成悬浮沉淀，同时放置在90℃的水浴环境中进行加热，继续予以13000r/min，离心5min；最后，分离并取出上清液后，继续进行PCR扩增、杂交及显色处理。其中，在HPV基因分型检测所使用到的基因芯片试剂盒，来自深圳亚能生物科技有限公司。

3.3HPV-DNA扩增结果判定

将显色液倒去后，采用清水冲洗膜条，通过对膜条的肉眼观察来判断其变化和检测结果：若是膜芯片中的HPV亚型探针位点处能够发现1个蓝色斑点，则提示受检者发生HPV单一感染；若是膜芯片中的HPV亚型探针位点处能够发现2个及2个以上蓝色斑点，则提示受检者出现双重或者多重H