《纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得》 教学课件1.pptVIP

分离微生物——平板划线法注意：1.无论是何种划线法，蘸取菌种前和划线后，接种环都要灼烧灭菌。2.无论是何种划线法，菌种只蘸取一次。思考：1.连续平行划线法，单菌落一般出现在划线的什么位置？2.扇形划线法，单菌落一般出现在划线的什么位置？分离微生物——平板划线法平板划线操作中三种灼烧的目的不同1.蘸取菌液前灼烧2.每次划线前灼烧3.划线操作结束后灼烧避免接种环上可能存在的微生物污染菌种。杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端。及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。分离、计数微生物——稀释涂布平板法无法计数1591720无法计数1411310无法计数15011319ml无菌水加入0.1ml稀释液例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？注意：1.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。2.计算微生物数量一般以培养皿中有30~300个菌落为宜。（159+141+150）÷3×10×105=1.5×108个/g每次稀释都要换一支吸管活动：接种、培养并分离酵母菌1.制作平板。按图1-11所示方法对两个直径为90mm的培养皿进行标记，分别向其中倒入未凝固的固体培养基，使培养基铺满培养皿底部，厚度约2mm。2.接种。(1)用平板划线法接种。在用接种环蘸取菌液进行接种前，应在酒精灯火焰上从接种环的圆环处依次向上灼烧灭菌。为避免灭菌后接种环的高温烫死菌种，应在挑取菌种前将接种环贴在培养容器内壁上降温。初次划线时可参照培养皿底部的标记点进行划线，以保证有最好的划线分离效果。活动：接种、培养并分离酵母菌（2）用稀释涂布平板法接种。如果1-12所示，在酒精灯旁涂布。操作提示：①用无菌水对酵母菌菌液进行一定浓度的稀释。②取0.1mL的稀释菌液加入平板中央。③在使用蘸有酒精的涂布器对平板中的菌液进行涂布时，应先在火焰上使酒精燃烧尽。此时手持涂布器的部位应高于火焰（图1-13），以免酒精沿器具流下，烧伤手指。（3）将菌种接种到液体培养基中。在无菌条件下用接种环将菌液接种到液体培养基中，同时以不接种菌液的液体培养基作为对照。3.培养。将所有培养容器置于25℃下培养24h.4.观察培养结果。获得单菌落后，可挑取菌落，并利用划线法接种到斜面讨论1.判断液体培养基成功接种酵母菌的依据是什么？2.如何判断是否分离出酵母菌的单菌落？判断依据是什么？3.在固体培养基表面涂布的菌种是否出现形态、颜色不同的单菌落？你认为出现该现象的原因是什么？4.仅从菌落特征是否能够认定你分离出了酵母菌？怎样进行进一步的鉴定？否。①挑取单菌落接入糖水中,培养一段时间检查是否能产生酒味②接入面团中观察能否发面;③挑取菌落样品，制作临时装片，在显微镜下观察、识别与未接种的培养基相比，接种的培养基由于酵母菌的增殖而变浑浊。与用酵母菌纯种在固体培养基表面接种的结果相比，用样品稀释液接种的固体培养基表面出现特征相同的、最小菌落即认为可能是分离出了酵母菌单菌落。若出现，可能是在接种过程中有杂菌污染活动：接种、培养并分离酵母菌计数微生物——显微镜计数法血细胞计数板专用盖玻片计数微生物——显微镜计数法1.每个血细胞计数板的正中央有2个计数区。2.红细胞计数区共400个小方格。例：回答下列相关问题。（1）用血细胞计数板对酵母菌计数时，吸取培养液前要轻轻振荡几次试管的目的是_________________________________。（2）若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多,难以计数,应先_______后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有________个。计数微生物——显微镜计数法使酵母菌分布均匀，计数准确稀释2×108使用血细胞计数板的注意事项：1.先盖盖玻片再滴加菌液，让菌液自行渗入，多余的菌液用滤纸吸去。2.滴加菌液时避免菌液滴到盖玻片上，还要防止产生气泡。3.计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。4.对压线细胞计数时，数上不数下，数左不数右。5.为减小误差，应对同一红细胞计数区中的细胞进行3次计数后取平均值。6.血球计数板使用完后，用自来水冲洗，洗后自行晾干或用吹风机吹干。7.血细胞计数板计数时不能区分死菌和活菌。计