血红蛋白的提取和分离经典.ppt

2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是A相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质B相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质C相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质D二者根本无法比较第81页,共93页，星期六，2024年，5月3、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A电荷的多少B分子的大小C肽链的多少D分子形状的差异4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是A调节pHB维持红细胞的能量供应C防止微生物生长D防止血液凝固第82页,共93页，星期六，2024年，5月6、记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序自上而下是：有机溶剂脂类物质血红蛋白溶液红细胞破碎物沉淀第83页,共93页，星期六，2024年，5月1.答:凝胶色谱法也称为分配色谱法,它是根据分子量的大小分离蛋白质的方法之一.所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体,这些小球体大多数是由多糖类化合物构成,小球体内部有许多贯穿的通道,当一个含有各种分子的样品溶液缓慢流经时,各分子在色谱柱内进行两种不同的运动,即垂直向下的运动和无规则的扩散运动.相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部,只能分布在颗粒之间,通过的路程较短,移动速度较快;相对分子质量较小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道,通过的路程较长,移动速度较慢.因此,样品中相对分子质量较大的蛋白质先流出,相对分子质量中等的分子后流出,相对分子质量最小的分子最后流出,这种现象又叫分子筛现象.1.凝胶色谱法分离蛋白质的的原理是怎样的?课后练习第84页,共93页，星期六，2024年，5月答:在一定范围内,能对抗外来少量强酸,强碱或稍加稀释不引起溶液pH发生明显变化的作用叫做缓冲作用,具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液.缓冲溶液通常是由一或两种缓冲剂溶解于水中制得,调节缓冲剂的配比就可制得不同pH范围的缓冲液.缓冲溶液的作用维持反应体系的pH不变.在生物体内进行的各种生物化学过程都是在精确的pH下进行的,受到氢离子浓度的严格调控.为了在实验室条件下准确地模拟生物体内的天然环境,就必须保持体外生物化学反应过程有与体内过程完全相同的pH.

2.什么是缓冲溶液?它的作用是什么?第85页,共93页，星期六，2024年，5月原理：电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程.许多重要的生物大分子,如氨基酸,多肽,蛋白质,核苷酸,核酸等都具有可解离基团,它们在某个特定的pH下会带上正电或负电;在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极方向移动.作用：电泳技术就是在电场的作用下,利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小,形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而达到对样品进行分离,鉴定或提纯的目的.

3.电泳的作用及其原理是什么?第86页,共93页，星期六，2024年，5月答:血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步,包括:样品处理,粗分离,纯化和纯度鉴定.首先通过洗涤红细胞,血红蛋白的释放,离心等操作收集到血红蛋白溶液,即样品的处理;再经过透析去除分子量较小的杂质,即样品的粗分离;然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去,即样品的纯化;最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定.

答:血红蛋白是有色蛋白,因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液.这使血红蛋白的分离过程非常直观,大大简化了实验操作.

4.你能描述血红蛋白分离的完整过程吗?5.与其他真核细胞相比,红细胞有什么特点?这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义?第87页,共93页，星期六，2024年，5月3、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳：2.试剂的配制：鉴定血红蛋白纯度。1.目的：①丙烯酰胺和N,N-亚甲基双丙烯酰胺:用去离子水配制29%（29g/100mL，下同）的丙烯酰胺和1%的N,N-亚甲基双丙烯酰胺的贮存液。②十二烷基硫酸钠（SDS）:用去离子水配成10%的贮存液，于室温保存。③用于制备分离胶和浓缩胶的Tris缓冲液。④TEMED：作用通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。⑤用去离子水配制10%过硫酸铵：作用是提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所必需的自由基。此溶液须配制新鲜液。⑥Tris—甘氨酸电泳缓冲液：25mmol/LTris，250mmol/L甘氨酸(pH8.3)，0.1%的SDS。⑦样品处理液：