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体内药物分析技术的研究进展

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R96A1672-5085（2011）19-0199-03

【摘要】本文通过查阅近年来国内外有关体内药物分析理论的文献，结合个人的实践经验和认识，对其测定前样品的处理以及测定的基本程序等方面进行了综述。

【关键词】体内药物分析样品处理样品测定

体内药物分析是药物分析的重要分支，具有自身独特的理论体系。该理论是研究生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分析方法学，从而获得药物代谢动力学的各种参数、及代谢的方式、途径等信息，有助于药物的研究和临床合理应用[1]。

1体内药物分析中的样品预处理

体内药物分析的样品成分复杂，被测组分含量低。因此，测定前样品需经过分离、纯化、富集、改变属性等处理后，方可进行测定。根据样品的种类、所用的测定手段、被测药物的种类及浓度等不同，预处理方法各异。

1.1预处理的基本理论[2]

1.1.1预处理的一般原则

体内药物分析中的样品预处理方法的选择，主要依据生物样品的类型、药物的结构及性质及测定方法的种类等。例如，血浆或血清需除蛋白，使药物从蛋白结合物中释出；唾液样品主要采用离心去除粘蛋白沉淀等。药物的酸碱性（PKa）与溶解性涉及到药物的萃取手段；药物在样品中的浓度相差悬殊，浓度大的样品对前处理要求稍低，浓度越低则样品前处理要求越高等。放射免疫测定法由于具有较高的灵敏度和专属性，生物样品只需经初步处理去除主要干扰物质后即可直接用于测定；而高效液相色谱法，为防止蛋白质等物质在色谱柱上沉积，上柱前需对生物样品进行去蛋白或进行溶剂萃取或制备衍生处理等。

1.1.2预处理的基本方法

1.1.2.1蛋白质的去除

沉淀蛋白的方法有多种，依据沉淀试剂种类的不同，析出的蛋白质的形状亦不同，且所得上清液的pH值也稍有差别。例如，加入与水混溶的有机溶剂可使蛋白质分子内及分子间的氢键放生变化而使蛋白质凝聚；加入中性盐，使溶液的离子强度发生变化，蛋白质脱水而沉淀；加入强酸及含锌盐及铜盐的沉淀剂，使溶液的pH值异于蛋白质的等电点，蛋白质以不溶性盐形式析出；此外，测定一些与蛋白结合牢固或形成缀合物的药物时，常采用有机破坏、酶解、酸水解或酶水解等方法，使被测药物得以释出。

1.1.2.2样品的分离与纯化

萃取法是应用最多的分离、纯化方法，包括液—液萃取法（LLE）和液—固萃取法（LSE）。多数药物是亲脂性的，而生物样品中大多数内源性杂质是强极性的水溶性物质。LLE基于该溶解行为的差异，药物能与多数内源性物质分离，适用于非专属性的波谱法分析；LSE是规模缩小的柱色谱法，具有所需样品量少、不易引入杂质、萃取效率高等优点，尤其适用于处理挥发性及对热不稳定的药物。

1.1.2.3样品的浓集

样品分离纯化后，其微量的组分分布在较大体积的萃取溶剂中。因此，常需要使被测组分浓集后再测定。浓集的方法有两种：一是在末次萃取时加入的萃取液尽量少，使被测组分萃取到小体积溶剂中，然后直接吸出适量供测定；二是挥去萃取容积法。

1.1.2.4样品的化学衍生化

该处理可使样品中的药物转变成具有可被分离的性质，从而增强药物的稳定性，提高检测的灵敏度和对光学异构体分离的能力等。药物分子中含有活泼H者，如含—COOH、-OH、-NH2、-NH、-SH等官能团的药物都可被衍生化。

1.2预处理的新技术

上述方法虽还在广泛使用，但它们存在离线处理、手动化、有毒试剂消耗量大及危害人体健康等特点。近年来，随着多种新技术新方法的采用，使得生物样品的处理技术向着低污染、低用量、高选择、高通量、自动化、在线化方向发展。

1.2.1固相萃取技术(SPE)

SPE基本原理是基于样品在两相之间的分配差异,即在固相和液相之间的分配不同。新一代的聚合物吸附剂，如Waters的0asisHLB，不需活化，也不怕溶剂流干，简化了样品制备过程，而且有很宽的pH范围，能萃取亲水、疏水、酸性、碱性或中性组分，特别适用于血浆、尿液等生物样品的制备。

1.2.2固相微萃取技术(SPME)

该技术基于气-固吸附、液-固吸附平衡的原理，利用待测物对活性固体表面有一定的吸附亲和力而达到分离富集的目的。王琦玮等[3]采用固相微萃取-气相色谱质谱法测定血浆中氯氮平的浓度，结果表明，该法灵敏度高、准确度好、操作简便；李弘韬等[4]采用甲基苯基乙烯基硅氧烷/羟基硅油复合涂层固相微萃取器，顶空萃取头孢匹胺钠中甲醇、乙醇、丙酮、乙腈和N，N一二甲基乙酰胺的残留量，避免了直接进样对色谱系统的污染。

1.2.3微透析取样技术(MD)

MD以透析原理作为基础，通过测定透析液中待测物的浓度来研究组织中待测物水平，为一种动态连续的取样方法。应用该技术可以采集真皮组织间液样本，结合现代检测技术，如酶联免疫法、高效液相色谱法等，研究皮肤局部生理代谢或疾病发生发展规律以及