感染性疾病免疫学检测PPT讲稿【96页】.pptx

感染性疾病免疫学检测课件;2024/5/30;2024/5/30;2024/5/30;2024/5/30;2024/5/30;2024/5/30;2024/5/30;2024/5/30;2024/5/30;2024/5/30;

;HBsAg抗原表位

1、共同决定簇：a（aa124-147）；

2、型特异决定簇：

（1）d/y（aa122，赖氨酸/精氨酸）；

（2）w/r（aa160，赖氨酸/精氨酸）；

四种亚型：adr、adw、ayr、ayw。

;检测中常见的问题;双抗体夹心一步法的钩状效应;钩状效应是HBsAg一步法检测时不可避免的现象；

由于钩状效应的存在，一步法检测HBsAg所得到的检测信号无法确定其真实性；

解决钩状效应的根本方法为固相抗体与抗原反应后分离游离抗原，再加标记抗体的两步法检测：

第一步：包被抗体捕获抗原成为固相，然后分离游离抗原；第二步：固相抗原与标记抗体结合，分离液相标记抗体后记录检测信号。;两步法检测能消除钩状效应：;2、人抗鼠抗体效应(Humananti-mouseeffect,HAMA效应)对检测的干扰;HAMA效应的假阳性模式：标本中的人抗鼠抗体分别与固相HBsAb和标记HBsAbMcAb结合，形成固相HBsAb－HAMA－HBsAb复合物。;3、S基因突变引起的HBsAg漏检：;;5、标本自身及前处理引起的干扰因素;6、操作不当或人为等外在因素;ELISA

检测模式：一步法。原材料：McAb；

检测结果：定性。

缺点：钩状效应，灵敏度较差，HAMA干扰、RF干扰，不能定量。

化学发光（某些公司）

检测模式：一步法。原材料：McAb；

检测结果：定量。

灵敏度好于ELISA，无RF干扰。

缺点：钩状效应，HAMA干扰，定量结果不能溯源到国际标准。;Abbott公司

检测模式：两步法。

原材料：McAb(固相），PcAb（Fab，标记抗体）；

检测结果：定量。

优点：

1）无钩状效应；

2）无HAMA、无RF干扰；

3）灵敏度高；

4）加用了针对不同突变株病毒抗原的检测抗体，可以进行HBsAg突变株的检测；

5）定量结果可溯源到国际标准。;时间分辨荧光

检测模式：两步法。

原材料：McAb(固相），PcAb（标记抗体）；

检测结果：定量。

特点：无钩状效应；灵敏度高；无HAMA干扰。不能进行HBsAg突变株的检测,可能有RF干扰，定量结果不能溯源到国际标准。;目前国际上常用的HBsAg标准物质：

德国兰根埃尔利希研究所（PaulEhrlichInstitute）参考物:PEI/ml;

法国参考物：ng/ml;

雅培参考物：ng/ml（Axsym),IU/ml(i2000)；

NIBSC参考物（WHO)：IU/ml.

（英国国家生物标准与检定所，NationalInstituteforBiologicalStandardsandControl,NIBSC)

1IU/ml=0.58PEI/ml=1.93“法国”ng/ml=5.59雅培ng/ml

;原材料：HBsAg

1、天然HBsAg：血源的纯HBsAg，即S蛋白（小球形颗粒）；;2、基因工程重组抗原（rHBsAg);2024/5/30;HBsAg阳性+HBsAb阳性模式讨论

在HBV感染及机体免疫过程中，可能有HBsAg和HBsAb同时存在的短暂过程，但很难出现在检测过程中：

HBsAg过剩时，HBsAb与其结合，以抗原抗体复合物形势存在，血中测不到游离抗体。

HBsAb过剩时，HBsAg以抗原抗体复合物形势存在，血中测不到游离抗原。

由于抗原抗体反应是可逆的，在检测灵敏度大幅提高的情况下，上述情况不能绝对化。;HBsAg阳性+HBsAb阳性模式讨论

部分HBV的S基因突变引起“a”决定簇氨基酸组成发生改变，导致其抗原性产生变化，野生株抗HBs不能将其清除。

不同亚型HBV感染。

两株不同亚型HBV感染及机体免疫过程：

1、两株不同亚型HBV同时或先后感染同一个体，合成两种不同亚型的HBsAg1和HBsAg2；

2、前者刺激机体产生HBsAb1，后者未刺激机体产生HBsAb2；

3、HBsAb1中和了相应的HBsAg1而不能中和HBsAg2,HBsAg2与HBsAb1同时存在。;常见HBsAb检测情况：

ELISA

原材料：天然抗原。

检测模式：一步法。

检测结果：定性，半定量。

缺点：可能出现假阳性，定量结果干扰因素较多。

化学发光

原材料：天然抗原。

检测结果：定量。

检测模式：一步法。;Abbott

原材料：重组抗原。

检测模式：两步法。

检测结果：定量。

时间分辨荧光

原材料：天然