马立克病病毒miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库的构建及鉴定.pdfVIP

马立克病病毒miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库的

构建及鉴定

马立克病病毒（Maizechloroticmottlevirus，MCMV）是一种重要的

植物病毒，可以引起玉米产量的显著下降。近年来，研究发现，MCMV

的miR-M4-5p可以通过调节宿主靶基因的表达来影响病毒感染的程度。

因此，对miR-M4-5p宿主靶基因的研究具有重要的理论和实际意义。本

文旨在介绍miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库的构建及鉴定的方法与结

果。

一、材料与方法

1.材料

本实验使用的材料包括MCMV感染的玉米植株、miR-M4-5p、RNA

提取试剂盒、高保真逆转录试剂盒、T4DNA连接酶、DH5α大肠杆菌、

高效细胞转染试剂、聚酰胺凝胶电泳试剂等。

2.方法

（1）RNA提取：从MCMV感染的玉米植株中提取总RNA，使用

RNA提取试剂盒按照生产商的说明进行操作。

（2）miR-M4-5p的逆转录与扩增：使用高保真逆转录试剂盒，根据

生产商的说明，逆转录miR-M4-5p，并进行PCR扩增。

（3）构建miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库：将miR-M4-5p与T4

DNA连接酶连接，经过连接反应后，将连接产物转入DH5α大肠杆菌中，

接种于含有抗生素的琼脂平板培养，过夜后培养于液体培养基中。

（4）文库的鉴定：从液体培养基中提取质粒DNA，通过限制性酶切

方法和PCR方法进行鉴定。限制性酶切鉴定使用多个不同限制性酶进行

酶切，聚酰胺凝胶电泳分析酶切产物的大小。PCR鉴定使用miR-M4-5p

特异引物，检测酶切产物是否包含miR-M4-5p。

二、结果

通过以上步骤成功构建了miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库，并进

行了鉴定。

限制性酶切鉴定结果显示，在酶切产物中存在多个不同大小的片段，

与预期的结果一致。聚酰胺凝胶电泳结果显示，酶切产物大小分布均匀，

符合文库的要求。

PCR鉴定结果显示，酶切产物中存在miR-M4-5p的特异PCR产物，

证明miR-M4-5p被成功地插入了文库中。

三、讨论与结论

通过本研究成功构建了miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库，并进行

了鉴定。鉴定结果表明，所构建的文库质量良好，可以用于后续的实验

研究。

miR-M4-5p是MCMV的一种调控因子，研究其宿主靶基因可以了解

其调控机制，并对病毒感染的机理进行深入研究。本文构建的miR-M4-

5p宿主靶基因cDNA文库为后续的相关研究提供了重要的实验基础和工

具。

总之，本研究成功构建了miR-M4-5p宿主靶基因cDNA文库，并通

过限制性酶切和PCR等方法进行了鉴定。该文库的构建为后续的研究提

供了有力的支持，有助于深入了解miR-M4-5p的功能和调控机制，进一

步揭示Maizechloroticmottlevirus感染的机理。