抗凝血酶的基因工程生产公开课教案教学设计课件资料.pptxVIP

抗凝血酶Ⅲ的基因工程生产;抗凝血酶Ⅲ;1、如何获得人抗凝血酶Ⅲ基因？

2、能否在人的唾液腺细胞中获得相关的mRNA，为什么？

3、获得人的抗凝血酶III基因后需通过PCR扩增，扩增时需要设计2种引物。在设计引物时，应满足的要求之一是：引物自身、引物之间不能存在_____以避免引物自身、两引物之间通过折叠形成双链区。

;4、如何筛选含有目的基因（人抗凝血酶Ⅲ基因）的大肠杆菌？

;受体细胞为大肠杆菌，生产出来的人抗凝血酶Ⅲ往往不具有生物活性，原因是什么？;利用转基因奶山羊乳腺生物反应器生产人抗凝血酶Ⅲ;新霉素抗性基因;当两性分子如磷脂和鞘脂分散于水相时，分子的疏水尾部倾向于聚集在一起，避开水相，而亲水头部暴露在水相，形成具有双分子层结构的的封闭囊泡，称为脂质体。;如何获得含有人抗凝血酶Ⅲ基因的克隆奶山羊？

;抗凝血酶Ⅲ（ATIII）在人体中主要由肝脏合成，是存在于血浆中的一种重要的抗凝血因子。研究者将人的抗凝血酶Ⅲ基因导入奶山羊细胞，获得乳汁中含有大量重组人的抗凝血酶Ⅲ的转基因克隆奶山羊。已知β-酪蛋白广泛存在于哺乳动物的乳汁中。回答下列问题：

（1）抗凝血酶Ⅲ基因的获得与表达载体的构建：从人的中获得抗凝血酶Ⅲ基因的mRNA，逆转录成cDNA，并利用技术进行扩增。为顺利将抗凝血酶Ⅲ基因连接到奶山羊β-酪蛋白基因表达载体上，在设计引物时，应在引物前加入，特地选用β-酪蛋白基因表达载体的原因是。与抗凝血酶Ⅲ基因一起连接到基因表达载体上的还有新霉素抗性基因，该基因的作用是。

（2）山羊成纤维细胞的培养、转化和筛选：取幼龄雌性动物的组织，

经处理后获得成纤维细胞悬液，将带有ATIII转基因载体的脂质体（由磷脂和胆固醇组成的脂质双分子层所构成的封闭囊泡）与成纤维细胞共培养，获得含有目的基因的受体细胞，该转化方法的原理是。

;（3）转基因奶山羊的克隆：将经培养后的转基因细胞取核移入去核卵母细胞中，用处理后进行胚胎体外培养。在移植到的代孕母羊的子宫前，应将早期???胎培养在的培养液中。代孕母羊怀孕、分娩获得转基因克隆奶山羊。

（4）人的抗凝血酶III的分子量大小及含量检测：收集转基因羊的羊奶和正常对照羊奶进行蛋白质凝胶电泳，使不同分子量的蛋白质在凝胶上分开，根据与比较，确定奶中抗凝血酶III的分子量大小。

利用与人的抗凝血酶III进行特异性结合，根据荧光强度判断羊奶中抗凝血酶III的含量。若最终获得的抗凝血酶III不能很好地行使其功能，可利用工程进行改造。;生产抗凝血酶Ⅲ的路径;谢谢！