实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察课件.pptVIP

实验三、

小鼠骨髓染色体标本的

制备及观察;一、实验目的;二、实验原理;二、实验原理;骨髓细胞数量多且分裂旺盛，可直接进行染色体标本的制备。取材方便，操作简单和无需无菌培养，是研究小型哺乳动物等染色体的常用方法。

;怎样才能制备一个好的染色体标本？

获得大量处于有丝分裂中期的细胞。

使细胞膜破裂，且染色体能够完整并较分散的释放出来。;秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期，积累大量中期分裂相细胞。

低渗作用:使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互缠绕和重叠。

预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂，固定维持细胞形态结构。

高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。;1.秋水仙素处理：选择体重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，与处死前4h，对其进行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。;3.低渗：用吸管吹打骨髓细胞使其分散，加入预温37℃的低渗液至8ml,将离心管至37℃水浴锅中，保温至少30min后取出，使细胞充分吸水膨胀。;6.滴片：冰片倾斜30°,细胞悬液距离玻片30cm高，在不重叠位置滴1～2滴，用口吹散细胞，过火焰干燥。

注意：载玻片预冷、高度、吹散、不可使载玻片烫手。

7.染色：在玻片上滴几滴Giemsa染液并铺匀，8～10min，倒去染液，晾干。（染色盘中进行）

8.小鼠染色体观察：低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中期分裂相.;小鼠骨髓染色体10×10;小鼠骨髓染色体10×40;;五、注意事项;六、作业