3.1-菊花的组织培养2.ppt

（一）制备MS培养基（二）外植体消毒（三）接种（四）培养（五）移栽（六）栽培三、结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格四、课题延伸2、培养基的使用③灭菌将分装好的培养基连同其他器械一起进行_________________。2、实验具体操作（1）.制备MS固体培养基实验室一般使用_____℃保存的配制好的培养基母液来制备4高压蒸汽灭菌2、实验具体操作（2）外植体消毒①选取菊花茎段时，要取________________。流水冲洗酒精无菌水氯化汞无菌水②消毒流程：浓度______摇动_____次时间_____s浓度______时间_____min至少清洗___次漂净_______生长旺盛的嫩枝70%2～36～70.1%1～23消毒液不是。对外植体进行表面消毒时，既要考虑到消毒效果，又要考虑到植物的耐受能力。在外植体消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？思考2、实验具体操作（3）接种①前期准备：用_________________消毒工作台，点燃酒精灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用_________________灭菌。②接种操作：插入外植体时_________________端朝上，每个锥形瓶接种_________________个外植体。70％的酒精火焰灼烧形态学上6～8接种注意事项①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种.②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件.③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分.思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。（四）培养1、愈伤组织的培养从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养.继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养.2、愈伤组织的继代培养在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色.3、试管苗的培养当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的见光培养.（五）移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日.1、打开封口膜2、清洗转移用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间.（六）栽培3、移栽珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培.幼苗长壮后，移栽到土壤中.幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花.1、外植体带菌2、培养基及接种器具灭菌不彻底3、接种操作时带入4、环境不清洁污染途径外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？污染物如何处理？1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）4、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？思考课题1菊花的组织培养组织培养是指在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞和原生质体，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。1、组织培养的原理是什么？2、组织培养的必要条件有哪些？3、植物的组织培养过程怎样？4、影响组织培养的因素有哪些？本节聚焦一、基础知识1、植物的组织培养相关知识（1）细胞分化①概念：植物个体发育中，相同细胞的后代在、、上发生稳定性差异的过程.细胞分化的原因：基因的选