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pcr扩增实验报告

篇一：DNA提取及PCR扩增实验

报告

PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳

刘琳1131428环境科学

一、实验目的

1．学习并掌握PCR扩增的基本原

理与实验技术。

2．对扩增后的DNA进行琼脂糖凝

胶电泳试验，并分析相应结果。

二、实验原理

1.PCR扩增

多聚酶链反应（PCR）技术的原理

类似于DNA的天然复制过程。在微量离

心管中加入适量缓冲液，加入微量模板

DNA、四种脱氧核苷酸（dNTP）、耐热

Taq聚合酶及两个合成DNA的引物，而

后加热使模板DNA在高温下（94℃）变

性，双链解链，这是所谓变性阶段。降

低溶液温度，使合成引物在低温（55℃）

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与模板DNA互补退火形成部分双链，这

是所谓退火阶段。溶液反应温度升至中

温（72℃），在Tap酶作用下，用四种dNTP

为原料，引物为复制起点，模板DNA的

一条双链在解链和退火之后延伸为两条

双链，这是延伸阶段。如此反复，在同

一反应体系中可重复高温变性、低温退

火和DNA合成这一循环，使产物DNA

重复合成，并在重复过程中，前一循环

的产物DNA可作为后一循环的模板

DNA而参与DNA的合成，使产物DNA

的量按指数方式扩增。经过30～40个循

环，DNA扩增即可完成。

2.DNA琼脂糖凝胶电泳实验

DNA分子在高于其等电点的溶液中

带负电，在电场中向阳极移动。在一定

的电场强度下，DNA分子的迁移速度取

决于分子筛效应，即分子本身的大小和

构型是主要的影响因素。DNA分子的迁

移速度与其相对分子量成反比。不同构

型的DNA分子的迁移速度不同。该电泳

方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA

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分子在泳动时的电荷效应和分子筛效

应，达到分离混合物的目的。

三、实验材料

仪器：PCR扩增仪、薄壁管、离心

管、移液枪、枪头、微波炉、电泳仪、

水平电泳槽、制胶版、紫外透射仪。

试剂：TapDNA聚合酶、dNTP、

buffer、两种引物、16S全长DNA样本、

无菌ddH2O、模板DNA、TBE、琼脂

糖、EB、显色剂。

四、实验步骤

1.PCR扩增

本次试验选择细菌16SrDNAV3区

片段进行扩增。

根据计算，首先取离心管按照

10×Buffer、