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HBV-DNAPCR检测规程

文件编号：SZGL-C005-00版本：00修订次数：00末次修（制）订日期

1目的

规范LightCycler荧光PCR检测仪检测乙型肝炎病毒（HBV-DNA）的检验工作，指导检

验人员正确进行乙肝病毒核酸定量的检测，保证检验结果的质量。

2范围

本规程适用于LightCycler荧光PCR检测仪检测乙型肝炎病毒（HBV-DNA）

3试剂

中山大学达安基因公司乙肝病毒(HBV)核酸扩增荧光检测试剂盒

4仪器

RocheLightCycler荧光PCR检测仪

高速台式冷冻离心机

微量加样器（覆盖1-1000μl）

5样品处理

样品处理按《PCR实验室标本处理规程》进行收集和处理，具体操作见本规程附录1和

附录2。

6测定

6.1PCR扩增

6.1.1打开稳压器电源，再打开计算机电源。

6.1.2打开扩增仪电源，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。

6.1.3将循环条件设定为：

程序循环温度保持时间

11次93℃2分钟

93℃5秒

240次

57℃45秒

31次40℃0秒

6.1.4检查反应管是否盖紧，以免荧光物质泄漏污染仪器。

6.1.5将待反应的PCR反应管放入扩增仪中，并根据实际情况和仪器操作规程在程序中定好

反应孔位置。

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HBV-DNAPCR检测规程

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6.1.6关闭扩增仪盖，按仪器操作规程开始循环。

6.1.7扩增结束后关闭扩增仪电源，取出PCR反应管，密封放入垃圾桶。

6.2产物分析

6.2.1条件设置：反应结束后自动保存检测数据文件，调整荧光数值为F/F。点击

12

Quantification读取结果。

6.2.2基线的确定：取3～8个循环的荧光信号。

6.2.3噪声容限（阈值）：调节在阴性质控品以上，要求在Step3：Analysis下相关性r

值＜-0.97，接近-1.0。

6.2.4对照标准：保证阴性质控品的Ct值不出现任何数值（默认为40）。

6.2.5最后记录仪器自动分析计算出的未知标本数值（M），关闭计算机。

7结果判断

7.1如果Ct值＝40，则实验样品的UUDNA含量（基因拷贝数/ml）＜1×10