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消毒与灭菌实验报告

篇一：《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告

《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告

实验目的

1.学习和掌握配制培养基（以牛肉膏蛋白胨培养基的配

制为例）的一般方法和原理。

2.了解消毒和灭菌的原理，掌握常用灭菌方法的操作步

骤。

实验原理

培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢

产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物

或积累代谢产物。在自然界中．微生物种类繁多，营养类型

多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。

但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、

能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对ph要求不一样．雷

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菌和酵母的培养基的ph一般是偏酸性的，而细菌和放线菌

的培养基的ph一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌

例外)。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将

培养基的ph调到合适的范围。此外，由于配制培养的各类

营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养

基必须立即灭菌．如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止

其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所

带来不利的影响。

高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压

灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。

待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭

排气阀．继续加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌

器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导

致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细

菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中

含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可

供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨

和nacl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维

生素，蛋白胨主要提供

氮源和维生素，而nacl提供无机盐。在配制固体培养基时

还要加入一定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶

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化，实际应用时，一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶

化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分

解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的

不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱

将其ph调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：

牛肉膏3.0g

蛋白胨10.0g

nacl5.0g

水1000ml

ph7.4—7.6

实验仪器与药品

1.溶液或试剂：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol／

Lnaoh、1mol／Lhcl。

2.仪器或其他用具：试管、三角瓶、1000ml烧杯（或

1000ml刻度搪瓷杯）、量筒、玻棒、培养基分装器、天平、

牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、ph试纸（ph5.5-9.0）、普通棉花、

牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。

实验步骤

（一）牛肉膏蛋白胨培养基的制备

1.称量（假定配制1000ml培养基）

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按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、

nacl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻

棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧

杯。也可放在称量纸上，称量后直接放人水中，这时如稍微

加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。

2.溶化

在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml