- 1、本文档共8页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
慢病毒包装、浓缩、纯化、滴度实验步骤--第1页
如对你有帮助,请购买下载打赏,谢谢!
一、包装细胞293T细胞的培养
一、293T细胞的冻存
1.随着传代的次数增加,293T细胞会出现生长状态下降,出现突变等。所以要在细胞
购进时就进行冻存。
2.在细胞对数生长期进行冻存,增加细胞复苏成活率。
3.倒去细胞上清液,加入D-Hanks液洗去残留的培养基。
4.加入0.25%的胰酶,消化10-20s后倒去。
5.镜下观察细胞变圆,细胞间间隙加大时,加入新鲜培养基吹打混匀。
6.细胞计数。
7.将细胞离心,1000rpm,2min。
8.根据计数结果加入细胞冻存液(70%完全培养基+20%FBS+10%DMSO)重悬细
胞,密度为3×10个/ml。
6
10.第二天将细胞放入液氮灌,并记录。
二、293T细胞的传代
1.当细胞生长至汇合率达到80~90%需要对细胞进行传代操作,以扩大细胞数量,维
持细胞良好的生长状态。
2.消化细胞,方法同上。
3.细胞离心结束后,加入完全培养基重悬。密度为3×105个/ml。
4.分到10cm培养皿中,10ml/皿。
三、293T细胞的复苏
1.当细胞传代次数过多(超过50代),细胞状态变差时或细胞出现污染事故时,需要
丢弃并对开始冻存的细胞进行复苏。
2.打开水浴锅,设置温度为40℃。
3.查看细胞库记录,根据记录从液氮灌中取出冻存的细胞(需戴上棉手套,防止被冻伤),
迅速丢入水浴锅中并快速晃动,在1~2min内使细胞溶液完全溶解。
4.将1ml细胞溶液加入9ml完全培养基中并混匀后转入10cm培养皿。
5.放回37℃、3%CO和95%相对湿度的培养箱中培养。
2
6.第二天观察细胞存活率。倒掉旧的培养基,加入10ml新鲜培养基。
二、慢病毒的包装、浓缩和滴度测定
1.所用病毒检测引物为WPRE特异引物,序列如下
慢病毒包装、浓缩、纯化、滴度实验步骤--第1页
慢病毒包装、浓缩、纯化、滴度实验步骤--第2页
如对你有帮助,请购买下载打赏,谢谢!
5-CCTTTCCGGGACTTTCGCTTT-3(forwardprimer),
5-GCAGAATCCAGGTGGCAACA-3(reverseprimer)and
5-FAM-ACTCATCGCCGCCTGCCTTGCC-TAMRA-3(probe)
2.TaqManUniversalPCRMasterMix(AppliedBiosystems,cat.no.
4304437)
3.TaqManDNATemplateReagentKit(AppliedBiosystems,cat.no.
401970)
4.TaqManRNasePcontrolreagent(AppliedBiosystems,cat.no.4316844)
用于包装的293T细胞的培养
用于包装的293T细胞(ATCCNo.C
文档评论(0)