临床基因扩增检验培训班PCR污染与预防【43页】.pptx

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临床基因扩增检验培训班PCR污染与预防;临床基因扩增

检查验收中存在的问题;聚合酶链式反应

成功的关键因素;标本质量与模板质量;认真分析标准曲线观察PCR反应体系与反应条件是否正确;;Ct;斜率增加：

（1）标准品为非线性的质粒。

（2）反应体系与反应条件未优化好。

（3）存在Taq酶的抑制剂或Taq酶的活性下降。

（4）加样不准确

斜率降低：污染或加样不准确。

截距增加：

（1）标准品的浓度不正确。

（2）标准品降解（反复冻融或未加载体DNA的低浓度标准品）

截距降低：

（1）标准品的浓度不正确。

（2）污染。

;PCR相关仪器的校准;批内与批间检测的可重复性;TBDNA（+）;Why？;聚合酶链式反应与诺贝尔化学奖;PCR的污染源;PCR去污染（decontamination）的措施;PCR的基本步骤与污染的发生;预防污染的措施

;标准实验室的组成及其功能（1）

;;标准实验室

的组成及其功能（2）

;Mn2+;标准实验室的组成及其功能;;Step3.BindingofaAv-HRPConjugateandAdditionofSubstrate;Step4.StopSolutionAdditionand

AbsorbanceMeasurement;标准实验室的基本规章制度;物流和人流;工作服;实验室卫生;防护罩/超净工作台

;几点建议;三、酶法防止PCR产物

的遗留污染;UNG消解法原理;以dUTP替代dTTP的PCR扩增产物，“”表示dUTP;再次扩增，扩增体系加入UNG，37度10分，可消去dU。

;95度10分钟，DNA在无dU的区域断裂，

因此遗留的DNA不能被扩增;UNG消解法的缺点;四、表面紫外线照射减少PCR污染的原理

;变性;;特点;去污染方法;结论

该用户很懒，什么也没介绍

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