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细胞因子与细胞黏附因子的测定

第一节生物学测定方法

常见的生物学测定法包括：基于DNA检测的分子生物学测定法和

生物活性测定法。

前者有细胞因子或细胞黏附分子DNA扩增法、RNA印迹法、原位

杂交法、核酸酶保护分析等，可定性或定量分析细胞因子和细胞黏附

分子的基因或mRNA。

后者则是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测方法，主要

用于细胞因子的测定。

生物活性测定法的基本原理，是根据不同细胞因子所具有的某一

方面独特的生物学活性，构建发挥这一活性的反应体系，通过观察其

活性作用的结果，判断有无相应细胞因子的存在。

有助于细胞因子检测的活性作用大致有以下几类：

1.刺激细胞增殖或集落形成的活性；

2.维持细胞生长和存活的特性；

3.抑制细胞生长或破坏细胞的效应；

4.促进细胞趋化或抗病毒作用等。

一、促进细胞增殖和抑制细胞增殖测定法

1.直接计数法

2.细胞代谢活性测定方法

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3.细胞代谢产物测定法

常用放射性核素掺入法和MTT比色法

二、细胞毒活性测定法

对指示细胞具有破坏作用的细胞因子，若与细胞共育将会导致细

胞死亡。因此，待测细胞因子做一系列稀释后加至指示细胞培养体系，

以检测培养细胞的死细胞数作为判断指标，死细胞数量与细胞因子的

活性成正比。

本法常用于TNF等的测定。

三、抗病毒活性测定法

抗病毒活性测定法主要用于IFN等细胞因子的检测。

四、趋化活性测定法

其诱导细胞迁移的方式包括趋化性和化学增活性。

趋化性可采用琼脂糖和Boyden盲端微孔小室趋化试验测定。

化学增活性可采用琼脂糖小滴化学动力学试验测定。

五、生物学活性测定方法学评价

细胞因子生物学活性测定法主要具有以下特点：

1.敏感性较高

2.特异性不高

3.操作繁琐

4.干扰

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第二节免疫测定方法

一、ELISA方法

双抗体夹心法是用于细胞因子测定的最常用方法。

细胞因子测定的标本主要包括两大类，一是血清（血浆）、关节

液、胸腔液、脑脊液或腹腔液等体液，可用于细胞因子和可溶性黏附

分子的检测；二是细胞体外培养后的培养上清液，只用于细胞因子的

检测。

二、流式细胞分析法

流式细胞分析法，是基于荧光抗体染色技术并借助流式细胞仪敏

感的分辨力所建立的方法。

该法主要用于细胞内细胞因子和细胞表面黏附分子的检测，通过

特异性的荧光抗体染色，能简单、快速地进行单个细胞水平的细胞因

子或黏附因子的检测，精确判断不同细胞亚群的细胞因子和膜分子的

表达情况。

根据荧光抗体的性质，荧光抗体染色分直接法和间接法，前者使

用荧光标记的细胞因子或黏附分子的特异性抗体，后者则用荧光标记

二抗。直接法较为常用，其敏感性虽不及间接法，但特异性强。

该法检测细胞内细胞因子时，主要包括以下基本步骤：

1.分离和