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肝纤维化动物模型制备的研究进展

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摘要

肝纤维化作为慢性肝病的一个重要病理特征，是机体对各类疾病引起的慢性肝脏损伤之后的损伤修复回应。现阶段肝纤维化的研究虽然已经相对成熟，但是制备良好的肝纤维化动物模型仍然是现如今研究的重点和难点。本文将几种常用的造模方法和一种新型的造模方法作一综述，并且比较每个模型的特点，为以后制备肝纤维化模型提供一些指导性的意见。

关键词：肝纤维化；模型；动物

引言

肝纤维化是机体对各类疾病引起的慢性肝脏损伤之后的损伤修复回应，随着肝组织的不断损伤进而发展成肝硬化，肝硬化及其并发症严重损害了人们的生命健康，因此肝纤维化的治疗是肝病治疗的关键环节。而肝纤维化动物模型的建立也就成为了肝病研究中的一个重要方向。随着人们对肝纤维化的逐渐了解，对其动物模型的研究也有了很大的进展[1]。建立和人类类似的肝纤维化动物模型不仅可以探寻疾病的发病机制，又能为疾病的预防、治疗提供实验依据，也能为临床选择一些可靠的防治肝纤维化的药物[2]。

1.常用的几种肝纤维化动物模型

1.1用四氯化碳诱导的肝纤维化模型

四氯化碳（Carbontetrachloride，CCL4）是一种常用的选择性肝毒性药物，它的作用机制是它进入动物体内后，可直接进到肝细胞内，活化形成自由基（-CCL3和-OOCL3），后者可直接破坏质膜，损坏肝细胞膜性结构，使肝细胞变性、坏死[3]。这种造模方法可以通过口服、腹腔或皮下注射等多种途径来制备。研究显示，CCL4腹腔注射造模结果优于皮下注射造模[4]，并且成活率较高，因此较为常用。这种经典的造模方法操作方便，简单可行，用时短，肝纤维化病变进程稳定可靠，现如今已被大量应用，是一种相对比较理想的造模方法。

闫冰川等[5]采用10％CCL4经腹腔注射于小鼠，于12周时处死小鼠，快速取下肝脏各叶。天狼猩红染色后镜检发现：CCL4处理12周后小鼠肝脏表面颗粒结节明显变大；汇管区纤维延长且明显延伸到肝小叶内，形成纤维隔同时可见肝小叶结构紊乱和形成的假小叶。说明小鼠产生了重度肝纤维化。

1.2用二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化模型

二甲基亚硝胺（Dimethylnitrosamine，DMN）具有肝毒性，接触可引起肝损害。DMN是一种具有肝毒性和细胞毒性的诱导剂，长时间小剂量使用可引发肝癌，大剂量可导引发肝纤维化。长时间大剂量使用DMN可致肝细胞大量坏死，纤维组织积聚，肝脏萎缩，进而产生肝纤维化、肝硬化。因此用这种方法造模效果明显。但是该药价格较贵，易导致突变和癌症，对实验人员有一定的伤害。

王丽娜等[6]采用一种改进的二甲基亚硝胺肝纤维化造模方法，以大鼠的体重DMN10μl/kg来进行腹腔注射，每2天一次，连续4周[7]，共14次。常规模型组大鼠注射4周时肝组织见出血灶明显、肝细胞坏死和炎性细胞浸润。同时可见汇管区--中央静脉纤维间隔和假小叶，但肝窦毛细血管化更为明显。大鼠在造模8周，即停止注射后4周时的肝组织炎症病变都比注射时减轻。这种改进的方法不仅降低了动物的死亡率，而且造模成功率高，之后可做进一步的研究。

1.3酒精诱导的肝纤维化复合模型

长时间大量饮酒可导致肝脏发生进行性的病理性变化，形成酒精性肝病。由早期的脂肪变性长成脂肪性肝炎，逐步演变为肝纤维化、肝硬化，最后发展为肝细胞癌。其中肝纤维化是多种慢性肝病发展为肝硬化的必经之路，它的形成原因与胶原合成酶、基质金属蛋白酶及其抑制因子等有关[8]。酒精的主要成分乙醇主要代谢场所是肝脏，乙醇及其代谢产物乙醛可经许多途径损伤肝脏的结构和功能而发生持续炎症反应，增加动物肝脏氧消耗率，使血窦血的氧消耗增多，对小叶中心肝细胞的氧供减少，从而使肝细胞退化和坏死，促使胶原纤维形成的主要因素就是坏死和炎症[9]。

王磊等[10]用二锅头酒（10ml.kg-1.d-1）、玉米油（2ml.kg-1.d-1）、吡唑（25ml.kg-1.d-1）以2次/天给模型组大鼠混合灌胃。第二周起以0.3ml.kg-1.d-1微量CCL4[11]橄榄油溶液腹腔注射，2次/周。第12周时模型组肝细胞周围纤维沉积增多，中央静脉周围、汇管区胶原纤维向小叶内延伸，肝细胞脂肪变性消失，炎性细胞出现严重浸润。空白对照组肝小叶结构、胞核结构清楚，肝细胞索整齐排列，肝窦正常。该种复合型方法制备模型稳定性好，操作简单，是较为理想的制备方法之一。

1.4结扎胆总管诱导的肝纤维化模型

长时间慢性胆汁淤积，因为胆酸和胆红素的共同作用使肝细胞变性、坏死和肝纤维化，结果导致肝硬化，病理学叫做胆汁性肝硬化[12]。结扎胆总管的原理是造成人为的胆道梗阻，从而引起梗阻以上部位的胆管扩张、胆汁淤积、胆道内压力增高，因为肝内血管受到扩张胆管的压力和胆汁