《生物制药技术》课件——30 蛋白质类药物的工业化生产2-蛋白质的提取.pdfVIP

生物制药技术

BiopharmingTechnology

蛋白质类药物的工业化生产2

蛋白质的提取

学习内容：

（1）蛋白质提取的部位

（2）组织和细胞的破碎

（3）蛋白质提取的条件

（4）影响提取的因素

学习重点：

影响提取的因素

一、蛋白质提取的部位

破碎细胞，溶剂提取。

血管细胞

二、组织和细胞的破碎

动物组织和细胞：超声波、电动搅拌器、匀浆器。

匀浆器

植物组织和细胞：加砂研磨、高压挤压、纤维素酶（具

有一定硬度和弹性的细胞壁）。

纤维素酶

三、蛋白质提取的条件

三、蛋白质提取的条件

提取条件：尽量提取所需蛋白质，防止蛋白酶的水解和

其他因素对蛋白质的破坏。

胰蛋白酶

四、影响提取的因素

为了保持蛋白质活性，选择提取方法时，需要考虑哪些

因素？

（1）溶液pH值

考虑蛋白质的最大活性。

蛋白质活性最大时的pH值，不等于最有效的提取pH值

（等电点），也不等于性质最稳定的pH条件。

如：胰蛋白酶活性最大的pH8.9，pH3时最稳定，选择提

取pH值，避免自我降解。

（2）缓冲盐的选择

缓冲盐的使用：猪血清蛋白电泳、酪蛋白提取等。

缓冲浓度：多数蛋白质在中性离子强度（0.05～

0.1mol/L）中的溶解度最大。

如原材料引起溶液酸碱度变化，则要控制提取物的pH

（如：植物鞣酸等）。

饮食习惯：小葱拌豆腐、菠菜豆腐汤。

菠菜豆腐汤

（3）金属螯合剂的加入

什么是螯合剂（chelators）？为什么要加螯合剂？

细胞内的重金属会提高蛋白质中的巯基氧化性，或与蛋白

质形成复合物，使之失去生物活性。

重金属与蛋白质反应

最常用螯合剂：乙二胺四乙酸（EDTA）和乙二醇双

（2-氨基乙基）醚-N，N，N’，N’-四乙酸（EGTA）。

EDTA结构式

蛋白质提取时，一定要去除金属离子吗？

有时候需要稳定蛋白质中的某些金属离子。

如：许多蛋白质被钙离子稳定，但EDTA会螯合二价钙离

子，因此不能用这种螯合剂。

（4）去垢剂处理

什么是去垢剂（chaotropicagent）？

如，洗手液

两性分子

用量：临界胶束浓度（criticalmicelleconcentration，

CMC）

临界胶束浓度

为什么用去垢剂？

降低蛋白质疏水作用，使结合于生物膜或颗粒的蛋白质

能够被尽量提取出来。

洗手液

（5）还原剂保护

保护巯基：纯化过程中，蛋白质由于经常暴露巯基，很容

易氧化，氧化的巯基能被还原剂还