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细菌的生化反应实验报告

微生物生理生化反应实验报告

2012年12月4日

姓名系年级2011级生科2班组别四

科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应

微生物的生理生化反应

一、【实验目的】

1.证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从

而说明不同微生物有着不同的酶系统。2.掌握进行微生物大分子

物质水解试验的原理和方法。3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚

定中的重要作用。4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

5.了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意

义和方法。

二、【实验仪器与试剂】

菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单

胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培

养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、

乳糖

发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白

胨水培养基（吲哚试验）；葡萄糖蛋白胨水培养基；

试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、

仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、

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德汉氏小管

三、【实验原理】

1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢

过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，

所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢

产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，

尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。

2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利

用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利

用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,

使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖

和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微

生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其

菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产

生淀粉酶。

3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察

菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说明此中菌可产生分解油脂的

酶。

4.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在

肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数细菌都能利用糖类作为碳

源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些

细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢

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气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分

解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使

溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能

使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无

气体。5.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。

（1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，

若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白

胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应

生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并非所有的微生物都具有分解色氨酸

产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测

的指标。大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。

（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖

生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，

乙酸和乳酸等多种有机酸，培养基就会变酸，使加入培养基中

的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色，即甲基红反应。大肠杆菌

为阳性，产气肠杆菌为阴性。