基因工程的基本操作程序课件.ppt

基因工程的基本操作程序1.2基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞操作过程目的基因的检测与鉴定基因工程的基本操作程序（1）编码蛋白质的基因：包括结构基因和调节基因。（2）没有翻译产物的基因：如rRNA基因和tRNA基因。（3）不能转录的DNA片段：如操纵基因。基因的种类目的基因的获取基因工程的基本操作程序非编码区编码区下游终止子编码区上游与RNA聚合酶结合位点非编码区编码区启动子启动子：基因首端,与RNA聚合酶结合,起始转录。终止子：基因尾端,阻止RNA聚合酶移动，使转录终止。原核细胞的基因结构基因工程的基本操作程序能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：真核细胞的基因结构基因工程的基本操作程序(一)、目的基因主要是______________________编码蛋白质的基因（二）、获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成目的基因的获取基因工程的基本操作程序1.基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。2.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因种类部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库从基因文库中直接获取基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序（一）基因文库的构建（1）基因组文库的构建提取某生物全部DNA用适当限制酶切割许多DNA片段与载体连接导入受体菌群该生物基因组文库（每个受体菌含有一段不同的DNA片段）（2）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成与载体连接导入受体菌群mRNA逆转录酶杂交双链核酸酶H单链DNADNA聚合酶双链DNA(cDNA)该生物cDNA文库基因工程的基本操作程序1、概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术通过这项技术可在短时间内大量扩增目的基因，又叫做体外DNA扩增技术。聚合酶链式反应体外特定DNA片段2、原理：DNA复制利用PCR技术扩增目的基因基因工程的基本操作程序4、条件：模板DNA(需含有目的基因)四种脱氧核苷酸(dNTP)热稳定DNA聚合酶(Taq酶）温度控制引物：与目的基因的起始段互补3、前提：一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物PCR基因工程的基本操作程序IMN变性复性延伸PCR基因工程的基本操作程序5/3/G—GT—C3/5/G—AC—C5/3/引物ⅡG—G变性复性延伸1、变性(90---95度)：目的基因DNA受热变性，解链为单链；2、复性（55---60）：引物与两条单链通过碱基互补配对原则结合；3、延伸（70---75）：在DNA聚合酶（Taq酶）作用下，从5′端→3′端进行延伸。5/3/A—G引物Ⅰ5、扩增过程PCR基因工程的基本操作程序PCR技术扩增过程a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，断裂，形成_______b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在TaqDNA聚合酶的作用下，从引物的______________________延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链5′端→3′端基因工程的基本操作程序DNA合成仪蛋白质的氨基酸顺序mRAN核苷酸序列基因DNA的核苷酸序列目的基因推测推测合成当基因比较小、蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时，可采用此种方法。DNA合成仪化学方法人工合成基因工程的基本操作程序1.用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。2.用___