分子发光分析法课件.pptx

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第一次记录荧光现象1575西班牙内科医生、植物学家

荧光是光发射概念、引入荧光术语1852Stokes观察奎宁、叶绿素

提出用荧光作为分折手段1864Stokes

第一个实际应用、铝一桑色素荧光测1867

1965以来,荧光光谱兴趣激增，生物化学家利用它的高灵敏度。二十世纪七十年代后期，引起国内学者注意

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（MolecularLuminescenceAnalysis）;;2、去活化过程

溶液中：10-14-10-12s10-13-10-11s10-2-10-6s

振动弛豫内部转换体系间的跨越

（发生在相同多重度间）（发生在不同多重度间）

S2S1T1(＜S1)T2

10-15sA1A2FP磷光发射

10-2-10s

基态S0

荧光发射外部转换

10-7-10-9s发生在不同电子能态间

（熄灭）;;;;;３、荧光的一些基本问题

c.激发光谱和荧光光谱

(1)激发光谱(2)荧光光谱

注意：１、实际测得的荧光光谱和激发光谱随仪器而异,其真实光谱必须要对其光源、单色器、检测器的光谱特性加以校正

２、真实的激发光谱与吸收光谱非常近似，而不是相同;;;;;4、荧光、磷光的测量

一般荧光分光光度计与紫外可见区吸光光度计异同

单束(５％光用于校正)

⊥;;;;;5、影响荧光发射因素

a.强荧光物质的结构特点

（１）?→?﹡比n→?﹡有利φf↑

（２）共轭?体系φf↑

（３）刚性平面结构φf↑

（４）取代基影响◆给电子基团φf↑

◆吸电子基团φf↓(φp↑)

◆取代基位置:邻、对φf↑

◆重原子取??基φf↓(φp↑)

;5、影响荧光发射因素

b.溶液环境因素

（１）溶剂◆取决于荧光体和溶剂的化学结构

(溶剂～荧光物成化合物,荧光分子电离状态改变)

λf.maxφf都有影响

◆重原子溶剂存在时φf↓(φp↑)

外重原子效应

（２）温度T↑φf↓

（３）pH平衡解离关系存在λf.maxφf均有影响;6、溶液荧光的猝灭

定义：荧光分子与其它分子相互作用，改使荧光强度下降。

猝灭过程实质题与发光过程相互竞争、缩短发光分子激发态寿命的过程，具体形式机理各不相同。