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实验一实验准备工作
一、器材与药品〔每实验室准备量〕
〔一〕普通器材
名称
数量
备注
普通天平
1台
大酒精瓶
3只
量筒
1000ml、250ml各一只
500ml盐水瓶
1只
玻璃棒
2支
火柴，标签纸，记号笔等
〔二〕无菌器材
名称
数量
备注
100ml或250ml盐水瓶
70只
大翻
70个
10ml吸管
3支
5ml吸管
5支
1ml吸管
1支
青霉素瓶
120只
青霉素瓶塞
120个
〔三〕药品
名称
数量
备注
重铬酸钾
2400g
浓H2SO4
4000ml
双蒸水
5000ml
由技术室提前准备
青霉素
10000单位/ml
链霉素
10000μg/ml
NaHCO3，KCl，NaCl，Na2HPO4·12H2O，KH2PO4，结晶紫，甲醛，无水酒精等
二、实验内容
〔一〕配清洁液
成分
量
备注
重铬酸钾
2400g
重铬酸钾溶于水中有时不能完全溶解，预先用2000ml热水助其溶解，再参加足量自来水，最后缓慢加浓硫酸。
浓硫酸
4000ml
自来水
20000ml
切记：浓硫酸要缓慢参加，且边加边搅拌！
〔二〕其他培养用液的配制及分工〔学生分为三大组〕
1、RPMI-1640培养液
成分
量
备注
RPMI-1640
2袋
搅拌溶解后过滤除菌，每瓶按100ml分装，塞好大翻，并注明名称配制日期和组别。每实验室20瓶。每小组1瓶。
NaHCO3
4.0g
2000ml大酒精瓶1只；无菌100ml盐水瓶20只。
2、无菌分装5.6％NaHCO3
成分
量
备注
无菌5.6％NaHCO3
50ml
按照3ml/瓶分装，每室16瓶，每小组1瓶。无菌操作。
无菌青霉素瓶20只；无菌5ml吸管1支。
3、无菌分装1％胰酶〔技术室提供〕
按照1ml/瓶分装，每室15瓶。每小组1瓶。
成分
量
备注
无菌1％胰酶
20ml
按照1ml/瓶分装，每室16瓶，每小组1瓶。无菌操作。
无菌青霉素瓶15只；无菌1ml吸管1支。
4、Hanks＇液〔母液由技术室提供〕
成分
量
备注
A液
100
按照1：1：18比例进行配比混匀，总量为2000ml，过滤除菌，然后按照每瓶500ml分装，并注明名称配制日期，每室4瓶。
B液
100
双蒸水
1800
无菌10ml吸管2支，1000ml量筒1只，1000ml大酒精瓶1只，无菌100ml盐水瓶20只。
5、双抗
成分
量
备注
青霉素〔80万U〕
2瓶
配制双抗终浓度为：16000单位/ml；链霉素10000μg/ml。按5ml/瓶分装，瓶口贴好胶布作好标记，胶布上注明配制日期和组别。每室20瓶。每小组1瓶。4℃保存备用。
链霉素〔1g)
1瓶
无菌Hanks＇液
100ml
无菌5ml吸管1支，无菌青霉素瓶20只。
6、血清的灭活和分装
成分
量
备注
无菌小牛血清
150ml
总量为150ml，56℃的水浴锅中进行热灭活，灭活时间30min，后按照每瓶5ml分装，并在瓶口处贴好胶布作好标记，胶布上写好日期和组别。每实验室30瓶。每小组2瓶。－20℃保存备用。
无菌5ml吸管1支，无菌青霉素瓶30只。
7、1×PBS配制
成分
量
备注
NaCl
8.0g
总量为1000ml，每瓶按70ml分装，用硫酸纸包好瓶口，待高压灭菌后第二天派人再换大翻保存。每实验室15瓶。每小组1瓶。
KCl
0.2g
Na2HPO4·12H2O
2.9g
KH2PO4
0.2g
去离子水
至1000ml
标好1000ml刻度的酒精瓶或1000ml容量瓶1只，无菌100ml盐水瓶15个。
8、染色液
成分
量
备注
结晶紫
0.5g
溶解、混匀，滤纸过滤
甲醛
10ml
NaCl
0.8g
无水乙醇
50ml
去离子水
加至100ml
250ml量筒1只，500ml盐水瓶1只。
9、分装VTP〔由技术室提供〕
成分
量
备注
无菌VTP
70ml
无菌操作按4ml/瓶分装，并注明日期和组别。每实验室15瓶。
无菌5ml吸管1支，无菌青霉素瓶15只。
☆未特别说明上述试剂均放置2～8℃冰箱保存备用。
☆每次实验除菌过滤的顺序：三个班的RPMI-1640先滤，然后再滤Hank＇s液。
☆每组完成后统一收好，下次再分配到各小组。
备注：常规实验室用品注意更换，包括酒精缸和酒精灯，棉球，一次性台布等。
实验二鸡胚原代成纤维细胞的制备与培养
一、实验目的
掌握鸡胚原代成纤维细胞的制备及培养的根本步骤；
掌握活细胞的显微镜下观察；
熟悉病毒在细胞内增殖的根本判断方法。
二、实验原理
离体动物组织通过温和的手段〔机械和酶消化〕形成单个细胞后，在适宜
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