饲料及饲料原料中伏马毒素的快速筛查 胶体金快速定量法.docxVIP

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DB36

江西省地方标准

DB36/TXXX—XXXX

饲料及饲料原料中伏马毒素的快速筛查

胶体金快速定量法

ScreeningofFumonisinsinFeedingStuffs

RapidQuantitativeMethodofColloidalGoldTechnique

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文稿版次选择

XXXX-XX-XX发布 XXXX-XX-XX实施

江西省质量技术监督局发布

饲料及饲料原料中伏马毒素的快速筛查胶体金快速定量法

1范围

本标准规定了用胶体金免疫层析法快速筛查饲料及饲料原料中的伏马毒素，为定量筛查方法。

本标准适用于大麦、玉米、玉米楼、小米、燕麦、糙米、高粱、小麦、玉米蛋白粉、DDGS等原料及饲料中伏马毒素的快速筛查。定量检测限为300|ig/kg(ppb),检测范围为300pg/kg(ppb)-10000pg/kg(ppb)o

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

GB/T27404实验室质量控制规范食品理化检测

3原理

本方法应用了免疫层析原理。试样提取液中的呕吐毒素与检测条中胶体金微粒发生反应，呕吐毒素与胶体金微粒的结合物以及胶体金微粒在侧流作用下移动，当到达检测线时，检测上包被的抗原与胶体金微粒结合发生呈色反应，颜色深浅与试样中伏马毒素含量相关。用读数仪测定检测条上检测线和质控线颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置曲线计算出试样中伏马毒素含量。

4试剂和材料

除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。

胶体金免疫层析快速筛查组件(参见附录A)。

伏马毒素检测试纸条：符合附录A规定的检测条产品，技术要求参考GB/T27404,按说明书要求冷藏保存。

稀释缓冲液：与胶体金检测条配套提供，或按照其说明书配制。

提取液：70%(v/v)甲醇溶液或胶体金检测条配套的提取液。

5仪器和设备

5.1天平：分度值0.01g。

5.2粉碎机：可使试样粉碎后全部通过20目筛。

3离心机：转速不低于4000r/mino

涡旋振荡器。

孵育器：可调节时间、温度，控温精度±1℃。

读数仪：可测定并显示胶体金定量检测条的测定结果。

6试样制备与保存

试样制备

按GB/T20195要求制备试样。

试样保存

将试样于T0℃?-20℃下避光保存。

7分析步骤

样品提取

取有代表性的样品500g,粉碎机（5.2）粉碎至全部通过20目筛,混匀。

准确称取10.00g试样于100mL具塞锥形瓶中，加入20.0mL试样提取液（4.2）,密闭，用涡旋振荡器（5.4）振荡Imin?2min,静置后用滤纸过滤，或取1mL?1.5mL混合液于离心管中，用离心机（4000r/min）（5.3）离心至少10秒。取滤液或离心后上清液100uL于另一离心管中，加入1.0mL稀释缓冲液（4.1.2）,充分混匀待测。

不同厂家的伏马毒素胶体金快速定量条所用的样品制备方法不同，如提供伏马毒素胶体金快速定量检测条使用说明，则按照使用说明中规定的方法进行操作。

样品测定

将伏马毒素胶体金检测条（4.1.1）从冷藏状态（2℃-8℃）取出放置至室温。将孵育器（5.5）预热至孵育温度45℃。将检测条（5.7）平放在孵育器（5.5）凹槽中，打开加样槽。

准确移取300HL待测溶液（7.1.2）,加入检测条加样孔中，关闭孵育器（5.5）盖。

孵育5min后，取出检测条（4.L1）观察质控线和检测线显色情况，必须出现清晰齐整的质控线即C线。若出现下述情况，视为检测条无效：

C线（质控线）不出现、弥散或严重不均匀；

T1或T2线（检测线）严重不均匀；

c）待测溶液掩盖或模糊了Tl、T2线或C线；

d）胶体金显色微粒没有通过Tl、T2线或C线。

无效的检测条（4.1.1）不要放入读数仪（5.6）进行测定。

选取读数仪（5.6）伏马毒素检测频道中“基质00”（MATRIX00）样品测定类型进行测定,测定需在2min内完成，读数仪（5.6）显示样品中伏马毒素的含量。

若读数仪（5.6）显示“+1500”,需将样品稀释后，读数仪（5.6）设定为“基质01”（MATRIX01）样品测定类型重新进行测定。稀释方法为：移取300PL稀释提取液（7.1.2）于离心管中，加入1.0mL稀释缓冲液后混匀，