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细菌的生化实验--第1页
细菌的生化实验
各种细菌具有各自独特的酶系统,因而对底物的分解力量不同,其代
谢产物也不同.用生物化学方法测定这些代谢产物,可用来区分和鉴
定细菌的种类.利用生物化学方法来鉴别不同细菌,称为细菌的生物
化学试验或称生化反应.生物化学试验的方法许多,这里主要介绍碳
水化合物的代谢试验1．糖(醇、苷)类发酵试验
(1)原理:不同种类细菌含有发酵不同糖(醇、苷)类的酶,因而对各
种糖(醇、苷)类的代谢力量也有所不同,即使能分解某种糖(醇、苷)
类,其代谢产物可因菌种而异.检查细菌对培育基中所含糖(醇、苷)
降解后产酸或产酸产气的力量,可用以鉴定细菌种类.
(2)方法:在基础培育基中(如酚红肉汤基础培育基pH7.4)加入
0.5~1.0％(w/v)的特定糖(醇、苷)类.所使用的糖(醇、苷)类有许多
种,依据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等,见
表6-4-1.将待鉴定的纯培育细菌接种入试验培育基中,置35℃孵育
箱内孵育数小时到两周(视方法及菌种而定)后,观看结果.若用微量
发酵管,或要求培育时间较长时,应留意保持其四周的湿度,以免培育
基干燥.
(3)结果:能分解糖(醇、苷)产酸的细菌,培育基中的指示剂呈酸性
反应(如酚红变为黄色),产气的细菌可在小倒管(Durham小管)中产
生气泡,固体培育基则产生裂隙.不分解糖则无变化.
(4)应用:糖(醇、苷)类发酵试验,是鉴定细菌的生化反应试验中最
主要的试验,不同细菌可发酵不同的糖(醇、苷)类,如沙门菌可发酵
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葡萄糖,但不能发酵乳糖,大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖.即便是
两种细菌均可发酵同一种糖类,其发酵结果也不尽相同,如志贺菌和
大肠埃希菌均可发酵葡萄糖,但前者仅产酸,而后者则产酸、产气,故
可利用此试验鉴别细菌.
单糖四碳糖:赤藓糖,五
碳糖:核糖核酮糖木糖阿拉伯糖,六碳糖:葡萄糖果糖半乳糖
甘露糖双糖蔗糖(葡萄
糖＋果糖)乳糖(葡萄糖＋半乳糖)麦芽糖(两分子葡萄糖)
三糖棉子糖(葡萄糖＋果糖＋半乳糖)
多糖菊糖(多分子果糖)淀粉
醇类侧金盏花醇卫茅醇甘露醇山梨醇
非糖类肌醇
2．葡萄糖代谢类型鉴别试验
(1)原理:细菌在分解葡萄糖的过程中,必需有分子氧参与的,称为氧
化型;能进行无氧降解的为发酵型;不分解葡萄糖的细菌为产碱型.发
酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖,而氧化型细菌在
无氧环境中则不能分解葡萄糖.本试验又称氧化发酵(O/F或Hugh－
Leifson,HL)试验,可用于区分细菌的代谢类型.
(2)方法:挑取少许纯培育物(不要从选择性平板中挑取)接种2支
HL培育管中,在其中一管加入高度至少为0.5cm的无菌液体石蜡以
隔绝空气(作为密封管),另一管不加(作为开放管).置35℃孵箱孵育
48h以上.
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细菌的生化实验--第2页
细菌的生化实验--第3页
(3)结果:两管培育基均不产酸(颜色不变)为阴性;两管都
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