DB12∕T 863-2019 水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术规程.docx

DB12天津

DB12

天津市地方标准

DB12/T8632019

ICS65.020.30B44

水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术规程

Aquaticprobiotics---TechnicalregulationforproductionofBacillusamyloliquefaciens

20190114发布20190215实施

天津市市场监督管理委员会发布

刖言

刖言

本标准依据GB/T1.12009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求起草。本标准由天津市农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：天津市农业生物技术研究中心。

本标准主要起草人：谢凤行、张峰峰、周可、赵琼、赵玉洁、孙海波、高宝山。

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I

水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术规程本标准规定了解淀粉芽胞杆菌生产中所涉及的生产环境和设备、生产技术流程、质量检测和储运。本标准适用于水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌的生产。2

水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术规程

本标准规定了解淀粉芽胞杆菌生产中所涉及的生产环境和设备、生产技术流程、质量检测和储运。本标准适用于水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌的生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB3095环境空气质量标准

GB3838地表水环境质量标准GB20287农用微生物菌剂

GB/T26428饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测

DB12/T8632019

i范围

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。3.1

解淀粉芽胞杆菌bacillusamyloliquefaciens

属于芽胞杆菌科，芽胞杆菌属，杆状，有鞭毛，革兰氏阳性菌，芽胞椭圆形，中生或近中生。3.2

原菌种theoriginalstrain

由单菌落分离纯化，并在固体斜面上繁殖保存的菌种。3.3

一级菌种firstclassstrain

原菌种在培养皿上活化，挑取单菌落接种至三角瓶中，振荡培养的菌种。3.4

二级菌种secondclassstrain

三角瓶中的菌种接种至种子罐中，在种子罐中放大培养的菌种。

4生产环境和设备要求

4.1生产环境

41.1厂区空气质量符合大气环境质量标准GB3095中II类要求。

41.2发酵用水符合地表水环境质量标准GB3838中III类水质要求，冷却水及其他用水符合该标准中IV类水质要求。

41.3生产车间配备消毒灭菌设施，菌种储藏室和无菌操作间与生产车间分开。

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42生产设备5

42生产设备

5.2菌种质量

5.2.1用于发酵的菌种应有菌种鉴定报告或菌株来源相关信息。

5.2.2在发酵前应先检测菌种的纯度和性能，如不纯或退化，应先进行提纯复壮。

5.2.3菌种在上罐生产之前需检测种子罐中菌体的纯度和浓度，不能有杂菌污染，浓度达到每毫升亿级以上。

5.3培养基

5.3.1原菌种和一级菌种的培养基应保证菌种生长的延滞期短，生长旺盛，碳、氮源营养丰富。5.3.2二级菌种培养基原则上为发酵培养基或接近发酵培养基。

5.3.3发酵培养基在保证菌体生长旺盛，利于芽胞形成的前提下，尽量利用来源充足、价格低廉的原料。

5.4灭菌

5.4.1液体发酵，发酵罐的装液量50%?70%，液体培养基、发酵设备、管道、补料罐等采用高压蒸汽灭菌，灭菌条件为121°C?125°C，0.1MPa?0.15MPa，灭菌20min?30min。

5.4.2固体物料含水率50%?60%，121C?130C，灭菌1.0h?2.0h。

5.4.3灭菌后无菌操作取灭菌后的培养基，制片，染色，镜检，无微生物说明灭菌彻底，若有，需重复5.3的工作。

5.5接种

摇瓶种子到发酵罐种子接种量为1%?5%，种子罐到发酵罐接种量为5%?7%。接种保证无菌操作，调节进、排气阀，使接种口有气体排出。