《多聚酶链式反应扩增DNA片段》（第1课时）名师课件.pptVIP

陕西省西乡县第一中学周勇利【课题背景】在刑事侦破案件中常需要对样品DNA进行分析，PCR技术能快速扩增DNA片段，在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。现在PCR技术已广泛应用于遗传病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和基因测序。【目标解读】1.理解PCR的原理、条件和反应过程2.尝试PCR技术与细胞体内DNA复制的过程DNA化学组成P脱氧核糖含氮碱基组成元素：C、H、O、N、P基本单位：脱氧核糖核苷酸鸟嘌呤（G）腺嘌呤（A）胞嘧啶（C）胸腺嘧啶（T）DNA全称：脱氧核糖核酸12543磷酸基团（在5的位置上）DNA复制的方向引物DNA母链DNA的复制方向总是从子链的5’端向3’端延伸引物从模板链3’端结合思考：为什么需要引物？因为DNA聚合酶不能从头开始DNA复制。DNA聚合酶只能从引物3?端延伸DNA链（合成子链）。因为DNA聚合酶只能将新的核苷酸加到已有的DNA双链上，所以DNA复制需要引物。从中选出适合的引物进行PCR:(1)CCTAGA~~~(2)GTTCGC~~~(3)AAAGT~~~(4)TTTCA~~~3?5?5?3?结论：1、引物结合在母链的3端。2、复制不是从头开始。3、DNA聚合酶从引物3端开始结合上去4、子链DNA延伸的方向从5到3（1）CCTAGA（3）AAAGT1、PCR（多聚酶链式反应）技术：体外模拟DNA复制的技术。2、原理：二、PCR原理利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。DNA双链单链变性（加热80-100℃）复性（缓慢冷却）重复30次1步骤：变性——复性——延伸三PCR的反应过程90℃以上50℃左右72℃左右2体外PCR扩增DNA的条件：模板：原料：酶：引物：DNA的两条链四种脱氧核苷酸TaqDNA聚合酶引物Ⅰ、引物Ⅱ在一定的缓冲液中进行严格控制温度模板DNA3?3?5?5?优教提示：可打开素材简单生命科学：PCR聚合酶链式反应三PCR的反应过程5?50℃引物1引物25?5?3?3?5?3?3?95℃三PCR的反应过程5?引物1引物25?5?3?3?5?3?3?72℃Taq酶Taq酶子链子链第1轮结束第2轮开始三PCR的反应过程PCR技术的操作过程1、上一次循环的产物作为下一次循环模板2、DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。PCR的反应过程总结：循环数变性复性延伸预变形94°C,10min－－30次９4℃，30s55℃，30s72℃，1min最后一次９4℃，1min55℃，30s72℃，1min细胞内DNA复制与体外PCR的技术区别：细胞内复制体外PCR技术解旋解旋酶、ATP作用下，部分解开高温，全部解开，不需解旋酶引物2种2种DNA聚合酶DNA聚合酶（细胞自身的，不耐高温）TaqDNA聚合酶（耐高温）复制特点半保留复制，边解旋边复制。半保留复制，完全解旋后复制。复制的方向子链的5’端向3’端延伸子链的5’端向3’端延伸本节小结一、PCR原理DNA双链变性（加热80-100℃）单链复性（缓慢冷却）二、PCR的反应过程步骤：变性——复性——延伸PCR扩增DNA的条件：模板、酶、引物、原料三、细胞内DNA复制与PCR技术比较课堂训练点击随堂训练中的课堂训练-《多聚酶链式反应扩增DNA片段》（第1课时），用答题卡测试一下对知识的掌握情况吧！