绵羊腹腔镜活体采卵技术规程.docxVIP

1

绵羊腹腔镜活体采卵技术规程

1范围

本文件规定了绵羊腹腔镜采卵中术语和定义、供体绵羊选择、抽卵液配制及采卵操作等内容。本文件适用于绵羊腹腔镜活体采卵。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T1571羊胚胎移植技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

活体采卵ovumpick-up

借助腹腔镜及其他装置在绵羊活体状态下采集卵母细胞的一系列过程。

3.2

供体donor

提供卵母细胞的绵羊个体。

4供体绵羊的选择及预处理

4,1供体绵羊的选择

选择优良品种，谱系清楚的一级以上母羊，发育正常，以1.5～6周岁为宜；产后空怀90d以上，至少有两次以上正常发情周期，繁殖机能正常；无遗传疾病、生殖系统疾病和传染性疫病。

4.2供体羊预处理

供体埋置孕酮海绵栓13d，撤除海绵栓前3d间隔24h分别注射重组FSH3mL诱导卵泡发育,撤除海绵栓前1d进行采卵。

5采卵操作

2

5.1采卵前准备

5.1.1供体羊空腹

供体羊空腹，冬季控水控料36h、夏季控水24h控料36h、羔羊手术前12h空腹。

5.1.2手术室

术前一天清扫手术室并用紫外线消毒60min；术前30min用酒精消毒工作台。

5.1.3器械与消毒5.1.3.1器械准备

两把长臂钳、三个套管、三个穿刺针、腹腔镜镜头和负压机。5.1.3.2器械消毒

提前30min用75%酒精喷洒长臂钳、套管、穿刺针和腹腔镜镜头，5min后放入器械杯；术前用新洁尔灭水将创布浸泡10min并甩干水分。

5.2穿刺操作

5.2.1麻醉与保定

按照NY/T1571的相关规定进行术前麻醉。穿刺手术前将动物固定在保定架上，将腹侧手术区域剃毛。保定架呈一定倾斜度，头部处于低位，用2%洗必泰和1%碘液进行消毒，用干净的创布遮盖在手术部位靠下方的位置，且用创巾钳固定。

5.2.2腹部穿孔

选择三个穿刺位置，第一个腹腔镜套管穿刺针在母羊左侧乳房基部下方2cm～5cm处的位置刺入最佳(靠近腹中线）；第二个穿刺孔位于腹中线两侧，离乳房10cm～15cm；第三个穿刺孔位于右侧乳房基部3cm～6cm处。穿孔时将腹部外皮向上提起，穿刺针抵住手术位置刺入，刺入时注意皮和腹膜的穿刺点位置不要错开，注意避开血管。

5.2.3设备放置

将腹腔内窥镜放入第一孔，将长臂钳放入第三孔，观察穿刺套管是否进入腹腔内，如果腹部脂肪过厚，导致视野内未看见套管，可用长臂钳或穿刺针拨开脂肪使套管暴露在视野内。第二孔中也放入一支长臂钳用于辅助右侧的长臂钳将卵巢固定好。如卵巢固定好，第二孔长臂钳拔出，将采卵针放进套管，准备采卵。

5.3采卵

5.3.1准备工作

5.3.1.1采卵液配制

采卵液配方见附录A。

5.3.1.2准备

采卵前将采卵针和吸管用采卵液冲洗一遍，试管内采卵液不少于2mL。

3

5.3.2卵泡穿刺

观察卵巢后，用卵巢固定钳夹住卵巢的系带部分，在内窥镜的观察下使用采卵针依次抽吸2mm以上的有腔卵泡，从下往上抽取，同时记录抽取卵泡的数量。抽取大卵泡或抽取的卵泡液多时，要轻轻的晃动采卵液，以防止采卵试管内的液体粘连；采卵试管内抽到血时要及时进行清洗；采卵完成后迅速将采卵试管送回实验室内进行检卵与体外培养。

5.3.3术后流程

手术完成后，将套管拔出，移除所有器械（如果伤口出血严重，要进行结扎缝合）。伤口滴少许青链霉素或皮下注射预防剂量的抗生素，注射0.2mL盐酸赛拉嗪。伤口喷洒碘酊。

4

附录A（资料性）采卵液配置

DPBS+10%（v:v）FBS+1mg/mLBSA+6IU/mL肝素钠+1.0%青链霉素合剂，混匀后用Millipore0.22μm的过滤器过滤，在0℃~5℃条件下可保存两周。