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3．散射光和拉曼光的影响及消除

3.散射光和拉曼光的影响及消除蕾莱(瑞

利)(Rayleighscattering

light)散射光??光子和物质分子碰撞

时,未发生能量交换,仅运动方向发生

改变,其波长和入射光波长相同,这种

散射光叫做瑞利散色光。发射光波长与激发光波几乎相等。由溶

剂、容器、胶体等散射引起,距离荧光

峰较远,只要选择适当的波长,由单色

器消除。3.散射光和拉曼光的影响及消除拉曼散射光Ramanscattering

light??光子和物质分子碰撞时,在

光子运动方向发生改变的同时,将部分能

量转给物质分子或从物质分子得到能量,

均使光子能量发生改变。前者使光子能量

减少,波长比入射光更长;后者使光子能

量增加,波长比入射光要短,这两种光均

称为拉曼散色光。发射光波长与荧光波长相近,即与荧光峰

靠近,难区别。由空白溶剂产生。3.散射光和拉曼光的影响及消除消除方法:

因为荧光波长不随激发光的

改变而改变,而拉曼散射光随激发光改

变而改变,所以,只要采用波长较短的

激发光进行激发,就可避免干扰。例如,硫酸喹啉及其溶剂(硫酸溶液)

在不同波长激发下的散射光。3.散射光和拉曼光的影响及消除

320nm激发

350nm激发

荧光荧光

硫酸喹啉及其溶剂

448448

320

350

(硫酸溶液)在不同

拉曼

360

波长激发下的光谱。

320

350

拉曼

拉曼

360

400

溶剂的激发光谱,拉

曼散射3.散射光和拉曼光的影响及消除硫酸喹啉分别用320nm,350nm激发

时的

荧光光谱。320nm激发,拉曼光在360nm,对荧光

(448nm)无影响;350nm激发,拉曼光

在400nm,与荧光(448nm)叠加,产生

干扰。因此,采用波长较短的激发光

(320nm)进行激发,就可避免拉曼光的

干扰。第二节分子荧光光谱仪荧光计、荧光分光光度计基本结构相似。仪

器基本结构由激发光源、样品池、

用于选择激发光波长和荧光波长的单色

器、检测器及记录仪组成。荧光光谱仪

光源

激发单色器

或滤光片

记录仪

激发

荧光

发射单色器

或滤光片

样品池

检测器仪器测量基本原理由光源发射的光经激发单色器得到所需的激发光

波长,

通过样品池后,一部分光能被荧光物质所吸收,荧光

物质被激发后,发射荧光。可以在溶液的各个方向观

察到荧光,但由于激发光一部分可透过溶液,为了消

除入射光和散射光的影响,荧光的测量通常在与激发

光成直角的方向上进行。为消除可能共存的其它光线的干扰,如由激发所产

生

的反射光、Raman光以及为将溶液中杂质滤去,以获得

所需的荧光,在样品池和检测器之间设置了发射单色

器。荧光作用于检测器上,得到响应的电信号。注意荧光测量方向。1.光

源在紫外-可见区范围,通常的光源是

荧光计用溴钨灯或高压汞灯。荧光分光光度计用氙弧灯,连续光

源,可用于200~700nm,在300~400nm

光谱强度几乎相等。新型激发光源:高功率连续可调染料

激光光源。2.单色器

激发单色器(第一单色器)??在光源和样品池之

间,滤去非特征波长的激发光。

发射单色器(第二单色器)??在样品池和检测器

之间设置,为消除可能共存的其它光线的干扰,

如由激发所产生的反射光、Raman光以及将溶液

中杂质滤去,以获得所需的荧光,。

荧光计用滤光片作单色器,分光能力差。

荧光分光光度计用棱镜或光栅作单色器,分光能力

强。3.样品池荧光用的样品池须用低荧光的材料制成,

四面透光,通常用石英,形状以方形和

长方形为宜。4.检测器荧光计用光电池或光电管,荧光分光光

度计用光电倍增管作检测器,并与激发

光成直角。第三节