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体型控制器:S6K1,相关磷酸化抗体介
绍
前言
S6K1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,因能介导核糖体蛋白S6磷
酸化而得名。众所周知,胞内蛋白磷酸化在多种生理及病理过程
中发挥重要作用,并与癌症的发生发展关系密切。除此之外,S6K1
还有控制体型的功能,下文我们将详细描述。
01S6K1概述
S6K1(RibosomalproteinS6kinasebeta-1)主要由三个结构
域组成,分别是N端结构域(NTD)、中间激酶结构域(KD)和C
端自抑制结构域(CTD)(如图1)。S6K1具有两种形式:p70和
p85,两者的区别是p70相较于p85缺失N端的23个氨基酸的核
定位序列(NLS),其余序列完全一致,所以S6K1的WB结果往往
呈现双条带的显影。
S6K1结构示意图(源自参考文献:/10.1016/j.lfs.2015.03.001)
S6K1介导核糖体蛋白S6的磷酸化,发挥调节转录、细胞周期及
维持细胞生成等作用,在癌症的发生发展中具有重要作用。S6K1
是雷帕霉素靶蛋白(mTOR)下游的一个重要效应器,同时也是一
个前沿的药物靶点。根据药融云数据显示,全球在研的S6K1靶点
药物共有26个,大部分处于药物发现阶段,其中走在最前列的是
默克公司的DIACC-3010(临床Ⅲ期),靶向多种肿瘤。
02S6K1调控体型研究
S6K1的激活是一个多步骤调控的过程。静息状态下,S6K1的C
端自抑制结构域与N端结合,不展现激酶活性。但是当C端多位
点磷酸化之后,S6K1转变为开放构象,暴露出389位的苏氨酸位
点(p70S6K1的T389对应p85S6K1的T412),并被mTORC1复
合物磷酸化,进而展示激酶活性。S6K1磷酸化S6的位点有Ser235、
Ser236、Ser240、Ser244、Ser247等。
在细胞模型中,如果将S6五个磷酸化位点(Ser235、Ser236、
Ser240、Ser244、Ser247)进行丙氨酸(Ala)替换,导致S6K1
无法磷酸化S6,则MEF、胰岛β细胞会增强蛋白合成、加快细胞
分裂速度,造成细胞体型明显变小。细胞生长和增殖的速率与蛋
白质合成的速率成正比。在正常细胞过程中,当生长因子和营养
物质存在时,S6K1会刺激蛋白质合成。
在小鼠模型中,同样在高脂肪饮食喂养的情况下,S6K1基因缺陷
小鼠体重相比野生型少30%以上,且主要是脂肪积累减少。结果
表明氧化磷酸化途径的上调和胰岛素敏感性的提高,S6K1基因缺
陷小鼠可避免高脂肪饮食引起的肥胖,且负向调节胰岛素信号。
因此,S6K1和S6不仅能够调控细胞的体型大小,还能够调控机
体的体型大小。
高脂肪饮食喂养4个月的小鼠体重变化(源自参考文献:
/10.1038/nature02866)
磷酸化抗体验证数据
RecombinantPhospho-p70S6Kinase1(Thr389)Antibody,
RabbitMonoclonal,Cat:110396-R0001
特异性验证:磷酸酶处理
Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedMCF7,untreated(line
A);treatedwithIGF-1(Cat:10598-HNAE)(100ng/mL,30min;+)(lineB);
treatedwithIGF-1andλ-phosphatase(lineC)usingPhospho-S6K1(Thr389)
rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110396-R0001)at1:5000dilution(upper),or
Anti-RPS6KB1rabbitpolyclonalantibody(Cat:10099-T38)(lower)at1:5000
dilution.
特异性验证:磷酸化多肽竞争
Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedMCF7,untreated(line
A);treatedwithIGF-1(Cat:10598-HNAE)(100ng/mL,30min),withoutpeptide
(lineB)orantigen-specificphosphopeptide(lin
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