体型控制器:S6K1,相关磷酸化抗体介绍.pdf

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S6K1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,因能介导核糖体蛋白S6磷酸化而得名。众所周知,胞内蛋白磷酸化在多种生理及病理过程中发挥重要作用,并与癌症的发生发展关系密切。除此之外,S6K1还有控制体型的功能,下文我们将详细描述。

体型控制器:S6K1,相关磷酸化抗体介

前言

S6K1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,因能介导核糖体蛋白S6磷

酸化而得名。众所周知,胞内蛋白磷酸化在多种生理及病理过程

中发挥重要作用,并与癌症的发生发展关系密切。除此之外,S6K1

还有控制体型的功能,下文我们将详细描述。

01S6K1概述

S6K1(RibosomalproteinS6kinasebeta-1)主要由三个结构

域组成,分别是N端结构域(NTD)、中间激酶结构域(KD)和C

端自抑制结构域(CTD)(如图1)。S6K1具有两种形式:p70和

p85,两者的区别是p70相较于p85缺失N端的23个氨基酸的核

定位序列(NLS),其余序列完全一致,所以S6K1的WB结果往往

呈现双条带的显影。

S6K1结构示意图(源自参考文献:/10.1016/j.lfs.2015.03.001)

S6K1介导核糖体蛋白S6的磷酸化,发挥调节转录、细胞周期及

维持细胞生成等作用,在癌症的发生发展中具有重要作用。S6K1

是雷帕霉素靶蛋白(mTOR)下游的一个重要效应器,同时也是一

个前沿的药物靶点。根据药融云数据显示,全球在研的S6K1靶点

药物共有26个,大部分处于药物发现阶段,其中走在最前列的是

默克公司的DIACC-3010(临床Ⅲ期),靶向多种肿瘤。

02S6K1调控体型研究

S6K1的激活是一个多步骤调控的过程。静息状态下,S6K1的C

端自抑制结构域与N端结合,不展现激酶活性。但是当C端多位

点磷酸化之后,S6K1转变为开放构象,暴露出389位的苏氨酸位

点(p70S6K1的T389对应p85S6K1的T412),并被mTORC1复

合物磷酸化,进而展示激酶活性。S6K1磷酸化S6的位点有Ser235、

Ser236、Ser240、Ser244、Ser247等。

在细胞模型中,如果将S6五个磷酸化位点(Ser235、Ser236、

Ser240、Ser244、Ser247)进行丙氨酸(Ala)替换,导致S6K1

无法磷酸化S6,则MEF、胰岛β细胞会增强蛋白合成、加快细胞

分裂速度,造成细胞体型明显变小。细胞生长和增殖的速率与蛋

白质合成的速率成正比。在正常细胞过程中,当生长因子和营养

物质存在时,S6K1会刺激蛋白质合成。

在小鼠模型中,同样在高脂肪饮食喂养的情况下,S6K1基因缺陷

小鼠体重相比野生型少30%以上,且主要是脂肪积累减少。结果

表明氧化磷酸化途径的上调和胰岛素敏感性的提高,S6K1基因缺

陷小鼠可避免高脂肪饮食引起的肥胖,且负向调节胰岛素信号。

因此,S6K1和S6不仅能够调控细胞的体型大小,还能够调控机

体的体型大小。

高脂肪饮食喂养4个月的小鼠体重变化(源自参考文献:

/10.1038/nature02866)

磷酸化抗体验证数据

RecombinantPhospho-p70S6Kinase1(Thr389)Antibody,

RabbitMonoclonal,Cat:110396-R0001

特异性验证:磷酸酶处理

Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedMCF7,untreated(line

A);treatedwithIGF-1(Cat:10598-HNAE)(100ng/mL,30min;+)(lineB);

treatedwithIGF-1andλ-phosphatase(lineC)usingPhospho-S6K1(Thr389)

rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110396-R0001)at1:5000dilution(upper),or

Anti-RPS6KB1rabbitpolyclonalantibody(Cat:10099-T38)(lower)at1:5000

dilution.

特异性验证:磷酸化多肽竞争

Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedMCF7,untreated(line

A);treatedwithIGF-1(Cat:10598-HNAE)(100ng/mL,30min),withoutpeptide

(lineB)orantigen-specificphosphopeptide(lin

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