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土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定--第1页

微生物综合实验报告

土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选

及淀粉酶活力的测定

学院：生命科学学院

班级：生物技术121班

姓名：

学号：

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一，摘要

本次实验选取广大的土壤，使用五点法采样，并制备出土壤悬液。然后将土壤悬液的上清液

分四个梯度稀释，使用平板划线法反复进行分离纯化，得到纯净的菌株。我们得到菌株后，

采用形态学的辨别方法，单染色，芽孢染色，革兰氏染色，淀粉水解实验，温度

实验，糖类发酵试验（葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露醇），VP试验，MR试验，吲哚试验，

柠檬酸盐利用实验，耐盐性试验，硝酸盐还原实验，明胶液化试验，运动性穿刺试验，酪素

水解试验，卵黄实验等方法检验，查阅伯杰氏手册后，鉴别其为蜂房芽孢杆菌。

二，材料与方法

1材料

1.1试剂

碘原液：碘1lg，碘化钾22g，加水定容至50OmL；

单染色：草酸铵结晶紫或石炭酸复红；

革兰氏染色：草酸铵结晶紫染色液，卢戈氏碘液，95%乙醇，0.5%沙黄染色液。

芽孢染色：5%孔雀绿染色液，0.5%沙黄染色液。

V.P试验：40%NaOH溶液，ɑ-奈酚。

吲哚试验：乙醚，吲哚试剂。

硝酸盐试验：甲液（对氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸100mL；乙液（α-奈胺0.5g+5mol/

醋酸100mL）；

酪素水解：牛奶；

酪氨酸水解：L-酪氨酸；

淀粉酶活力测定：1%3,5-二硝基水杨酸试剂。

1.2仪器：

无菌培养皿，接种环，土样，三角瓶，烧杯，试管，酒精灯，无菌吸管，载玻片，吸水纸等。

恒温摇床，恒温培养箱，高压蒸汽灭菌箱，超净工作台，水浴箱，磁力搅拌器，涂布器，显

微镜，移液管，移液枪。

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1.3培养基

筛选及活化培养基

淀粉20g，蛋白胨10g，NaCl2.5g，琼脂10g，自来水1000ml,pH自然。

斜面种子培养基

牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15～20g，自来水1000ml，pH7.2～7.4；

摇瓶发酵培养基

称取可溶性淀粉2g，蛋白胨1g，牛肉膏0．3g，氯化钠0．5g溶于100mL蒸馏水中。

pH自然；

蛋白胨液体培养基（作吲哚实验用）

蛋白胨10g，NaCl5g，自来水1000ml，pH7.2～7.4，121℃灭菌20min；

葡萄糖蛋白胨培养基（VP和MR试验用）

蛋白胨5g，葡萄糖5g，NaCl5g，自来水1000ml，pH7.2～7.4，121℃灭菌20min；

糖发酵培养基（作细菌糖发酵试验用）

蛋白胨2g，NaCl5g，K2HPO40.2g，1%溴麝香草酚蓝水溶液3ml，待试糖10g(一般糖