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免疫印迹实验报告——wester-blot--第1页

Westernblot实验报告

摘要：目的：学习并掌握westernblot分离蛋白及观察方法

方法：westernblot

结果：见后文

结论：westernblot能很好地分离蛋白

关键词：westernblot、分离、小鼠组织、蛋白

Westernblottestreport

Abstract:objective:Learnandmasterthewesternblotproteinisolatedandobservationmethod

Methods:westernblot：,sdsandelectrictransfer

Results:seebelow

Keywords:Westernblot、separate、mousetissues、protein

前言:

免疫印迹又称Western印迹(Westernblotting)，与DNA的Southern印迹技术

相对应，两种技术均把电泳分离的组分从凝胶转移至一种固相载体(通常为NC膜)，

然后用探针检测特异性组分。不同的是，Westernblotting所检测的是抗原类蛋白质

成分，所用的探针是抗体，它与附着于固相载体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生

特异性反应。该技术结合了凝胶电泳分辨力高和固相免疫测定特异敏感等诸多优

点，具有从复杂混合物中对特定抗原进行鉴别和定量检测，以及从多克隆抗体中

检测出单克隆抗体的优越性。该技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的

水平而无需对靶蛋白进行放射性标记。目前，Westernblotting广泛用于蛋白质研究、

基础研究和临床医学的研究。

免疫印迹可分成两个步骤：蛋白质由凝胶转移至固相基质；特异性抗体检测。

蛋白质转移通常由电泳实现，现常用的方法有二：1半干法：将凝胶和固相

基质似三明治样夹在缓冲液湿润的滤纸中间，通电10-30分钟可完成转移；2湿法：

将凝胶和固相基质夹在滤纸中间，浸在转移装置的缓冲液中，通电45分钟或过夜

课完成转移。本试验采用湿法转移。免疫印迹用膜通常有硝酸纤维素膜和尼龙膜

两种。大多数应用前者。本实验也用硝酸纤维素膜进行转移。

1试剂与仪器

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免疫印迹实验报告——wester-blot--第2页

1.1试剂（所有试剂均供两组用）

1.1.18%电泳分离胶的配制

H2O6.9ml

30%丙烯酰胺4.0ml

1.5mol/LTris3.8ml

10%SDS0.15ml

10%过硫酸胺溶液0.15ml

TEMED0.015ml

1.1.25%浓缩胶配制

H2O5.5ml

30%丙烯酰胺1.3ml

1.0mol/LTris1.0ml

10%SDS0.08ml

10%过硫酸胺溶液1.08ml

TEMED0.015ml

1.2仪器夹心式电泳槽，电泳仪，硝酸纤维素膜，直径9cm培养皿，剪刀，镊

子，刀片，微量移液枪，普通滤纸

2试验步骤

2.1蛋白质的提取

2.1.1取小鼠组织0.2g，用生理盐水洗去表面毛发等杂物，剪碎，加入生理盐水

2ml；

2.1.