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限时练4生物技术与工程综合题
(时间：50分钟)
【综合提升】
1.(2023·重庆市质检)利用基因工程技术培育出油脂高产的四尾栅藻，是获取生物
柴油的新途径。科学家欲从紫苏中提取DGAT1基因(催化油脂合成的关键酶基
因)，导入到四尾栅藻细胞，获得转基因油脂高产的四尾栅藻，流程如图。质粒
pCAMBIA与PCR扩增出的DGAT1的酶切位点如图所示。现有BamHⅠ、BglⅡ、
EcoRⅠ三种限制性内切核酸酶，它们识别并切割的碱基序列如下表，请回答下
列问题：
BamHⅠ5′G↓GATCC3′
BglⅡ5′A↓GATCT3′
EcoRⅠ5′G↓AATTC3′
(1)①与②过程使用的酶分别是________________、____________________。
(2)将DGAT1与pCAMBIA分别用限制酶BglⅡ、BamHⅠ切割后进行连接可形成
重组质粒，目的基因和质粒能连接成重组质粒的原因是________________。
将重组质粒导入大肠杆菌后，可向培养基中加入________筛选出导入重组质粒的
大肠杆菌。
(3)筛选出的重组质粒存在DGAT1基因，但DGAT1在四尾栅藻细胞中表达出的
肽链不正确，原因可能是_______________________________________________。
为进一步筛选出符合要求的重组质粒，选用________限制酶对不同的重组质粒进
行酶切处理，得到的电泳结果如图所示，其中________组重组质粒为所需质粒。
r
2.(2023·湖北随州一中模拟)载体质粒P0具有四环素抗性基因(tet)和氨苄青霉素
r
抗性基因(amp)以及一些酶切位点。请回答下列问题：
r
(1)若图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，四环素抗性基因(tet)上有
r
EcoRⅤ的酶切位点，氨苄青霉素抗性基因(amp)上无酶切位点，质粒其他部位
也有合适的其他种类的酶切位点，选用EcoRⅤ酶处理质粒的原因是
_____________________________________________________。
(2)若P0质粒含有3个限制酶切点(如图2)，请据图回答问题：
在构建上图中重组质粒时，若用两种酶切割目的基因的两端及质粒，应选用
________________两种酶，好处是___________________________(至少答2点)。
(3)若P0质粒含有5个限制酶切点(如图3)。将重组质粒导入大肠杆菌，并成功
地在大肠杆菌中得以表达。请据图回答问题：
重组质粒形成与否需要鉴定和筛选，方法是将重组质粒的DNA分子导入大肠杆
菌，用含抗生素的培养基进行培养，观察大肠杆菌的生长、繁殖情况并进行判断，
如图4所示：
①如果受体菌在培养基A上能生长、繁殖形成菌落，而不能在培养基B上生长、
繁殖，则限制酶a的切点是图3中的____________________________________。
②如果受体菌在培养基A上不能生长、繁殖形成菌落，而在培养基B上能生长、
繁殖，则限制酶a的切点是图3中的_______________________________。
③如果受体菌在培养基A和培养基B上都能生长、繁殖形成菌落，则限制酶a
的切点是图3中的_____________________________________________________
_____________
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