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临床基因扩增实验又称PCR实验;是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫
病等病毒感染性疾病的一种检测手段..它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩
增的方法;测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒..由于该检
测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、
对样品要求低等优点;因此被临床医生广为认可;已广泛应用于医院的临床诊断和
各防疫检测部门的禽疫病诊断..但是;这种实验需要有能保证绝对安全、配置合理
的实验室和非常规范的操作为前提..近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越
来越得到重视;因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作
用..本文主要从临床基因扩增检验实验室的平面布局;空调通风系统设计、气流控
制和污染的防制几个方面对实验室设计中的主要特点进行了阐述..
临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染..因此;实验室的
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平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的..下面
就对这几个方面分别进说明..
二、PCR实验室平面布局
临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、
标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区..为避免交叉污染;
进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行;即只能从试剂贮存和准备区→标
本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区..
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行..
三、实验室空调通风系统设计及压力控制
PCR实验室并没有严格的净化要求;但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能
性;宜采用全送全排的气流组织形式..同时;要严格控制送、排风的比例以保证各实
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验区的压力要求..
1、试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制
备..试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区;不得经过其他区域..试剂原材
料必须贮存在本区内;并在本区内制备成所需的贮存试剂..
对与气流压力的控制;本区并没有严格的要求..
2、标本制备区
该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸RNA、DNA提取、贮存及其加
入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成..
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压;以避免从邻近区进入本区的气
溶胶污染..另外;由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染;所以应避免在
本区内不必要的走动..
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3、扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增..此外;已制备的DNA模板和合成
的cDNA来自样本制备区的加入和主反应混合液来自试剂贮存和制备区制备
成反应混合液等也可在本区内进行..在巢式PCR测定中;通常在第一轮扩增后必
须打开反应管;因此巢式扩增有较高的污染危险性;第二次加样必须在本区内进
行..
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压;以避免气溶胶从本区漏出..为避
免气溶胶所致的污染;应尽量减少在本区内的不必要的走动..个别操作如加样等
应在超净台内进行..
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4、扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定..如使用全自动封闭分析仪器检测;此
区域可不设..
本区是最主要的扩增产物污染来源;因此对本区的
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