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大肠菌群测定步骤--第1页

食品大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测步骤

一、培养基制备

1、生理盐水

氯化钠8.5g

蒸馏水1000.0ml

将氯化钠溶于蒸馏水中，搅拌均匀后用量筒量取225ml分装到各个广口瓶中，

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121C高压灭菌15min，备用。

2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤

称取37克放入烧杯，将各成分溶解于1000ml蒸馏水中，放电炉子上加热并搅

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拌均匀，分装于装有倒立发酵管的试管中，每管10ml，装完盖帽，121C高压灭菌

15min，双料培养基除蒸馏水不变外，其余成分加倍。

3、样品制备（在无菌室中进行）

（1）固体或半固体样品

无菌操作称取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分振摇、混匀，

制成1：10的样品稀释液备用。

（2）液体样品

以无菌吸管吸取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分混匀，制

成1：10的样品稀释液备用。

4、样品稀释

用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml

生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管混匀，

制成1：100的样品匀液。

按照该操作程序，可制备1：1000，1：10000。。。。。。等10倍系列稀释样品匀

液，每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。

根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可

包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释

度做两个平皿。同时分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

二、大肠菌群的测定（MPN法）

1、选取适宜的三个连续稀释度的样品匀液，每个稀释度均接种三管月桂基硫酸

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盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml。36C+1C培养24h-48h后，观察倒管内是

否有气泡产生，并记录24h和48h内产气的LST肉汤管数。对未产气的试管，可以

轻敲试管壁的方式观察是否有较细小的气泡从管底逸出，如果所有LST肉汤管均未

产气，可按。。报告结果；如果LST管有产气，则按下面步骤作证实试验。

2、证实试验

用直径3mm的接种环从上面1中所有24h和48h内发酵产气的LST肉汤管中分

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别挑取培养液1环，分别移种于煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，于36C+1C培养

48h+2h，记录所有BGLB肉汤管的产气管数，根据BGLB肉汤的产气管数查MPN表，

并按四（1）报告结果。

3.粪大肠菌群的测定

用直径为3mm的接种环从上面1中所有48h+2h内发酵产气的LST肉汤管中分别

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挑取培养液1环，转种于EC肉汤管中并放置于带盖44.5C+0.5C的恒温水浴箱