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染菌的检查、原因分析和防止措施

染菌的检查、原因分析和防止措施

1.染菌的检查与判断

在发酵过程中对杂菌污染的及早发现，及时处理，是免除染菌造成严重损失的重要问题。因

此，要求有确切、迅速的方法来检出杂菌的污染，目前常用方法主要有以下几种：

（1）显微镜检查

通常用革兰氏染色法，染色后在高倍显微镜下观察。对霉菌、酵母发酵，先用低倍显微镜

观察生产菌的特征，然后再用高倍显微镜观察有否染菌存在，根据生产菌与杂菌的特征区别，

判断是否染菌。必要时，可进行芽孢和鞭毛染色。

（2）平板划线培养或斜面培养检查法

先将经灭菌的固体培养基倒入灭菌的平板中置培养箱摄氏37度，保温24h检查无菌即可

使用。将需要检查的样品，在无菌平板上划线，分别置摄氏37度、摄氏27度培养，以适

应嗜中菌和低温菌的生长，一般在8h后即可观察。

噬菌体检查可采用双层平板培养法，底层同为肉汁琼脂培养基，上层减少琼脂用量。先将

灭菌的底层培养基熔后倒平板，凝固后，将上层培养基熔解并保持摄氏40度，加生产菌作

为指示菌和待检样品混合后迅速倒在底层平板上，置培养箱保温培养，经12~20h培养，观

察有无噬菌斑。

培养基（PH7.0）

葡萄糖（%）牛肉膏（%）蛋白胨（%）氯化钠（%）琼脂（%）

上层0.51.01.00.51.0

下层0.51.01.00.52.0

（3）肉汤培养检查法

将需要检查样品接入经灭菌并经过检查无菌的肉汤培养基中，放置摄氏37度和摄氏27

度分别培养24h，进行观察，并取样镜检。此法常用于检查培养基和无菌空气是否带菌，也

可用于噬菌体检查，此时使用生产菌作为指示菌。

葡萄糖酚红肉汤培养基：牛肉膏0.3%，葡萄糖0.5%，氯化钠0.5%，蛋白胨0.8%，1%

酚红溶液0.4%，PH7.2。

用以上的检查方法检查未发现污染，还不能肯定未被污染。

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除以上方法外，还可以从发酵过程的异常现象来判断是否染菌，如溶解氧、PH值、排气

中CO2含量和菌体酶活力等变化来判断。

2.发酵染菌率和染菌原因分析

（1）发酵染菌率

发酵的总染菌率是指一年内发酵染菌的批数与总投料发酵批数之比。

发酵染菌是在发酵罐中发生的染菌率，包括染菌后被挽救不了导致倒罐的批数，但种子罐

培养的染菌不接入发酵罐，不导致发酵染菌的另行计算。

（2）染菌原因分析

在发酵染菌之后，必须分析染菌原因，总结发酵染菌的经验教训，把发酵染菌消灭在发生

之前，防患于未然，是积极制服发酵染菌的最重要措施。

造成发酵染菌的原因很多，但总结归纳起来，其主要原因有：无菌空气带菌、设备渗漏、

灭菌不彻底、操作失误和技术管理不善。在发生染菌后，根据无菌试验结果，参考以下方法

进行分析，找出原因，杜绝污染。

（A）

从染菌时间来看，发酵早期染菌，可能原因有：种子带菌，培养基和设备灭菌不彻底，接

种操作不当，无菌空气带菌；发酵后期染菌，可能原因有：中间补料污染，设备渗漏，操作

问题。

（B）

从污染的杂菌种类来看，污染耐热的芽孢杆菌，可能是培养基或设备灭菌不彻底；污染球

菌、无芽孢杆菌等不耐热杂菌可能是种子带菌，设备渗漏；污染霉菌，一般是无菌室灭菌不

彻底或操作问题。