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2010级发酵大实验（1）

实验报告

任课老师：

姓名：

专业：生物技术

班级：

学号：

日期：2013年6月

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实验报告

一、目的要求：

了解筛菌的基本操作，包括：培养基配制，灭菌，接种，涂板，摇菌，紫外

分光光度计的使用等。

二、实验材料

1、菌种来源：英语公园葡萄树下土壤和生物学院院楼门口土样。

2、培养基：

（1）淀粉液体培养基：可溶性淀粉1%、蛋白胨1%、葡萄糖0.5%、NaCl0.5%、

牛肉膏0.5%

（2）淀粉固体培养基:可溶性淀粉1%、蛋白胨1%、葡萄糖0.5%、NaCl0.5%、

牛肉膏0.5%、琼脂粉1.5%。

3、器皿：试管，量筒，烧杯，移液管，培养皿，洗耳球，玻璃棒，酒精灯，

接菌环，三角瓶，玻璃棒等。

4、仪器：高压蒸汽灭菌锅，水浴锅，恒温培养箱，摇床，天平、紫外可见分

光光度计等。

5、试剂：1%碘液、1MNaOH、DNS、pH5.60.05M乙酸/乙酸钠缓冲液、

1%淀粉溶液、1mg/mL的麦芽糖，结晶紫溶液。

6、其他：封口膜、纱布，棉花，试管架等。

三、实验步骤：

1、初筛：

（1）配制培养基：按照上述培养基成分及数量称取各物质，放入三角瓶中，加

水到100ml，包扎。和包扎好的试管、移液管、涂布器、培养皿等一起放入灭菌

锅中121℃高压灭菌20min。然后干燥后使用。

（2）倒平板：把培养基置于无菌工作台上，待冷却到55℃左右后，倒入灭菌后

的平板中，每个平板中约15-20ml，之后待冷却凝固。

（3）菌悬液制备：我们组分别从英语公园的葡萄树下和生物学院院楼门口采集

土样，各称取10g，放入装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡20min后静置5min。

（4）浓度稀释：在无菌试验台上进行浓度梯度稀释,把土样摇匀，从中吸取1ml

置于事先灭好菌的试管中，再加入9ml无菌水，再从该试管中吸取1ml土样置

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于另一只无菌试管中，加入9ml无菌水，依次稀释到10^-5、10^-6、10^-7、10^-8

待用。

（5）涂布平板：在超净工作台中，分别在10^-5、10^-6、10^-7、10^-8浓度下

各取1ml两种土壤稀释液倒入已冷却的平板中（因有一根试管破裂所以第二组

土壤缺少10^-7浓度的稀释液，不过不影响之后的实验）。用涂布器涂布均匀，

在平板上标注土样的浓度。把标注好的培养皿放入37℃培养箱中培养

16-18h。

（6）加碘筛选：取出培养好的平皿，放入冰箱中培养24h，取出后在长出的菌

落上滴加碘液，菌落周围如有无色透明圈出现，说明淀粉被水解，即该菌株能

产生淀粉酶。

2、复筛：

平板划线：用上述配制培养基和到平