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微生物设计性实验

枯草芽孢杆菌的分离及筛选

1实验目的

掌握枯草芽孢杆菌的分离筛选的基本原理，熟练掌握无菌接种技术、微生物分离筛选技

术和微生物形态观察技术。了解枯草芽孢杆菌的分布、营养、生长等特点，以及它所具有的

产淀粉酶的功能。根据这些特点进行分离和筛选，从而得到纯菌株。

2实验原理

枯草芽孢杆菌属革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中

央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基

中生长时，常形成皱醭。需氧菌。有的菌株是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的

菌株具有强烈降解核苷酸的酶系。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，

故名。选择含淀粉丰富的土壤为最佳，80度的水浴处理样品1小时，目的是杀死微生物营

养体，残留芽胞。利用稀释涂步法，在淀粉的培养基培养，培养1-3天后，观察。然后，进

行初筛与纯化，鉴定参照《伯杰氏细菌手册》鉴定或者利用显微镜进行革兰氏染色，确认是

否为枯草芽孢杆菌。再复筛，测定其淀粉酶活，最后确定菌株。

3实验材料

3.1选择培养基

本次实验进行产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的筛选，所以应选淀粉培养基。

配方：

牛肉膏5.0g

蛋白胨10.0g

氯化钠5.0g

可溶性淀粉10.0g

琼脂20g

蒸馏水1000ml

调整pH至7.2

配置时应先把淀粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中。

3.2溶液或试剂

牛肉膏1.25g

蛋白胨2.5g

氯化钠1.25g

可溶性淀粉2.5g

琼脂5g

碘11克，碘原液2毫升，碘化钾42克，可溶性淀粉2克，磷酸氢二钠45.23克，柠檬

酸8.068克，氯化钴25克，重铬酸钾3.34克，100毫升0.01NHCL。

3.4仪器或其他用品

平板培养皿10个、试管15支、三角瓶2个、烧杯3个、称量纸、高压蒸汽灭菌锅、干

燥箱、恒温培养箱、超净工作台、无菌涂布器、电热恒温水浴、500ml量筒、显微镜、无菌

吸管、无菌培养皿、无菌刻度吸管、酒精灯、记号笔、火柴、试管架、接种钩、滴管等。

4实验流程

倒平板→制备梯度稀释液→涂布→培养→初筛→复筛→纯化→保存

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5实验步骤

实验前准备

制备淀粉培养基，无菌水，在121摄氏度下灭菌20min。倒平板。把接种工具，培养基，

和其他用品全部在超净工作台上摆好，进行紫外线灭菌30min。

5.1制备土壤稀释液

取土样时最好选取如花坛等地方的土样，选好采样地点，铲产去表层5cm，取5～15cm

处。用无菌器具规范采样几十克，装入无菌的塑料袋或纸袋中扎好，记录采样时间、地点、

采样环境等以备考证。采样后应尽快分离。振摇约二十分钟，使土样与水充分混合，将细胞

分散。放入盛有99ml无菌水三角瓶中，常压80度的水浴处理样品1小时后，取出。

用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，

然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一盛