猪蓝耳病纯化疫苗及其制备方法[发明专利].pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN106237323A

(43)申请公布日

2016.12.21

(21)申请号201610839861.8C12N7/00(2006.01)

C12N7/02(2006.01)

(22)申请日2016.09.22

(83)生物保藏信息

CGMCCNo.126972016.08.23

(71)申请人齐鲁动物保健品有限公司

地址250100山东省济南市历城区工业北

路243号

(72)发明人王蕾巩志宏于宗幸魏联果

高小龙

(74)专利代理机构北京君智知识产权代理事务

所(普通合伙)11305

代理人郑明

(51)Int.Cl.

A61K39/12(2006.01)

A61P31/14(2006.01)

权利要求书1页说明书7页附图1页

(54)发明名称

猪蓝耳病纯化疫苗及其制备方法

(57)摘要

本发明涉及一种猪蓝耳病纯化疫苗及其生

产方法。其中还涉及Marc-145的全悬浮细胞株及

其在制备猪蓝耳病疫苗中的应用。制备猪蓝耳病

纯化疫苗，包括以下步骤：1)悬浮驯化获得

Marc145的全悬浮细胞株；2)制苗用细胞的无血

清悬浮培养；3)蓝耳病毒的培养及收获；4)病毒

液纯化；5)疫苗的配置。采用本方法制备疫苗，解

决了现有疫苗抗原含量低、血清残留和细胞残留

等问题，可有效提高疫苗免疫效力，降低过敏反

应。该方法使用无血清培养基全悬浮培养Marc-

145细胞生产猪蓝耳病毒，配合超滤设备对病毒

进行浓缩、纯化，是简单、便宜、高效的纯化方法。

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CN106237323A权利要求书1/1页

1.一种猪蓝耳病纯化疫苗的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)细胞悬浮培养：将Marc-145细胞进行悬浮培养；

(2)接毒方法：将猪蓝耳病毒种子培养液接入以上悬浮培养的细胞中，继续培养至收获

时，收获培养病毒液；

(3)将收获的病毒液采用中空纤维柱进行澄清、微滤、浓缩后，采用连续流蔗糖密度梯

度离心或分子筛层析柱对滤液进行纯化；

(4)采用灭活剂灭活纯化的病毒液后与佐剂混合配置灭活疫苗或者将纯化的病毒液与

冻干保护剂混匀分装后经冻干制成活疫苗。

2.如权利要求1所述的一种猪蓝耳病纯化疫苗的制备方法，其特征在于所述Marc-145

细胞进行悬浮培养的方法是：取超低温冻存的Marc-145全悬浮适应株细胞，快速融化后加

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入摇瓶中培养扩大，取密度为3×10～3×10/ml的细胞接入细胞罐，得到Marc-145细胞全

悬浮培养液；

3.如权利要求1所述的一种猪蓝耳病纯化疫苗的制备方法，其特征在于所述接毒方法

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是：Marc-145细胞在生物反应器中培养24～72小时，密度为6×10/ml～6×10/ml，按照体

积比0.1％～1.0％接种蓝耳病病毒，继续培养至80％左右的细胞出现典型CPE时，收获病毒

液。

4.如权利要求1所