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融合蛋白HSP70EGFP的表达、纯化及其在树

突状细胞内化抗原中的应用

【摘要】目的：研究树突状细胞（DCs）对热休克蛋白70（HSP70）

融合蛋白的内化作用.方法：首先原核表达并分离纯化HSP70和增

强型绿色荧光蛋白（EGFP）的融合蛋白HSP70EGFP.实验中所用

DCs来源于人外周血.内化实验分3组进行：将1，2组DCs分别与

融合蛋白HSP70EGFP和蛋白EGFP孵育30min；第3组先将DCs

与HSP70孵育30min，再与HSP70EGFP孵育30min.之后将3组

DCs转至37℃孵箱内，培养0.5，1，2和24h，应用流式细胞仪检

测含HSP70EGFP或EGFP的DCs数量.应用IL12Elispot

法检测HSP70EGFP等抗原促进DCs分泌IL12的效果.结果：①

成功获得了重组蛋白HSP70EGFP，Mr约为97000，HSP70EGFP

表达量占总蛋白的35.7%.纯化后的融合蛋白HSP70EGFP溶液经

紫外线灯照射时发出鲜绿色的荧光.②流式细胞仪检测结果显示在

37℃孵育0.5h后，HSP70EGFP孵育的DCs组阳性率为63.3%，

其余两组为阴性.在37℃孵育1，2和24h后，3组阳性率均大于

80.0%.IL12Elispot检测结果显示，在刺激DCs活化及分泌

IL12的水平上，HSP70EGFP与脂多糖（LPS）之间的差别无统

计学意义(Pgt;0.05)，而HSP70EGFP的活化DCs能力明显高于

EGFP(P=0.001).结论：①受体介导的吞噬作用在DCs内化HSP70

EGFP的初始阶段起主要作用，随孵育时间的延续，吞饮作用占主

要地位.②HSP70EGFP可促进DCs分泌特征性细胞因子IL12.

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【关键词】吞噬作用；受体介导；树突细胞；重组融合蛋白质

类；热休克蛋白质70；绿色荧光蛋白质类

热休克蛋白家族在肿瘤免疫中发挥着免疫佐剂的功能，对开

发肿瘤疫苗具有重要意义.许多研究采用标记的热休克蛋白观察

HSP肽复合物在抗原递呈细胞（antigenpresentingcell,APC）

上的呈递过程，发现APC表面存在HSP受体［1-2］.有研究发现，

gp96融合蛋白与受体结合后，可以激活树突状细胞（dendritic

cells，DCs）分泌IL12和TNFα，增强其抗原递呈能力［3］.

而对热休克蛋白70（heatshockprotein,HSP70）融合蛋白在抗原

递呈细胞上的递呈过程的研究报道较少.我们设计了HSP70和